慢性虚血ラット脳中で発現変化する新規単離因子の生理機能・発現制御機構の解明

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12470194
• 研究機関: 富山医科薬科大学
• 研究代表者: 東田 道久 富山医科薬科大学, 和漢薬研究所, 助手 (20207525)
• 研究分担者: 渡邉 裕司 富山医科薬科大学, 和漢薬研究所, 教授 (10012642)
• キーワード: 記憶学習 / 両側総頸動脈永久結紮 / antisense / pH sensitive liposome / RT / PCR / neuronal differentiation / rat brian / NG108-15

研究概要

慢性脳血流低下によって生ずる老年性痴呆の分子発症機構の解明をめざして、モデル動物としての両側総頸動脈永久結紮(2VO)ラットの脳中での遺伝子発現変化を検討し、昨年までに2VO4日後と4ヶ月後に著しく発現量が増大する因子としてvof-21、とvof-16を単離し、その全長や、脳組織内分布、細胞内分布等について明らかにした。本年はそれら新規因子の機能解析のための検討をおこなって、以下に示す知見を得た。単離vof-16、vof-21は培養NG108-15細胞系にも存在することをRT/PCR法により確認した。そこで、両因子の細胞内での生理機能を検討する目的で、アンチセンス法を行うこととし、そのためアンチセンスを効率的に細胞内に導入するための検討を行い、pH感受性リポソームが有用であることを見い出した。同方法によりFITC標識したアンチセンスS-oligoは細胞に効率良く取り込まれた。その細胞を用いて、増殖、神経分化、細胞内Ca2+動態への影響を引き続き検討している。また、vof-21およびvof-16は共にヒト海馬cDNAライブラリー中に存在することも確認し、その配列の解析を行っている。ゲノム上流域の配列についても解析をすすめている。なお、本研究費を用いた研究ではこの他に、センス鎖を決定するRT/PCR法を用いた簡便な手法の開発や、RNA editingに関する研究、神経分化とセロトニン受容体mRNA発現との関連性についての研究も行った。

研究成果

• [文献書誌] Tohda, M. et al.: "Determination methods of sense sequence based on RT/PCR"J. Biochem. Biophys. Meth.. 55. 101-105 (2003)
• [文献書誌] Tohda, M. et al.: "The mRNA Expression of Serotonin 2C Subtype Receptors Uncoupled With Inositol Hydrolysis in NG108-15 Cells"Japanese Journal of Pharmacology. 90. 138-144 (2002)
• [文献書誌] Skalko-Basnet N. et al.: "Uptake of Liposomally Entrapped Fluorescent Antisense Oligo-nucleotides in NG108-15 Cells : Conventional versus pH-Sensitive"Biological & Pharmaceutical Bulletin. 25. 1583-1587 (2002)
• [文献書誌] Kang T.H.et al.: "Pteropodine and isopteropodine positively modulate the function of rat muscarinic M_1 and 5-HT_2 receptors expressed in Xenopus oocyte"European Journal of Pharmacology. 444. 39-45 (2002)
• [文献書誌] Sukma M. et al.: "CNS inhibitory effects of barakol, a constituent of Cassia siamia Lamk"Journal of Ethnopharmacology. 83. 87-94 (2002)
• [文献書誌] 趙 他: "自然発症高血圧ラットにおける釣藤散の抗高血圧作用:釣藤鈎及び石膏の役割について"Journal of Traditional Medicines. 19. 153-157 (2002)