| 研究分担者 |
西郷 健一 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (60323424)
和田 佑一 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (10282485)
浅野 武秀 千葉大学, 大学院・医学研究院, 講師 (80143311)
圷 尚武 千葉大学, 医学部・附属病院, 医員
丸山 通広 千葉大学, 医学部・附属病院, 医員
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| 研究概要 |
<1.軟骨細胞,膵島の混合培養:>___-
ハムスターの骨端軟骨を採取、コラゲナーゼ処理にて軟骨細胞を分離・培養し、In vitroでの増殖,重層構造、繊維芽軟骨形成を確認した。次に、DAラット膵よりコラゲナーゼ消化法にて分離した膵島とLewisラットの膝関節より分離した軟骨細胞を混合培養した。膵島の周囲に軟骨細胞の増殖がみられ、両者はviabilityを保持したまま培養可能であった。膵島形態は保たれ,インスリン分泌も培養後3週間良好に保たれた。
<2.膵島への効率的遺伝子導入法の検討:>___-
non-viralの遺伝子導入法として#1.Gene gun法(Helios^<TM> Gene Gun(BIO-RAD))、#2.Lipofection法(LIPOFECTAMINE2000(LIFE TECHNOLOGIES))、#3.Electroporation法(Gene-Pulser II(BIO-RAD))の3種類の方法を用い、膵島への遺伝子導入効果につき検討した。犬膵島を用い、plasmid pCMS-EGFP(CLONTECH)を導入した.導入効率はLipofection法で95%と他の方法に比較して優れていた。また導入膵島の機能も非導入膵島と比較してほぼ同等であった。
<3.独自の膵島凍結保存法の開発:>___-
独自のバッグ大量凍結保存法を考案した。Beagle犬膵島を骨髄移植に臨床応用されているCP-1液(極東製薬工業)を用いて、バッグ(Cryogenic storage container,CPL99,CharterMed Inc.)に封入し、Program freezer(Cryomed Model 1010)にて緩速凍結した。解凍後の膵島は良好な形態を示し、回復率も80%以上と良好であり、充分なインスリン分泌能がみられた(Static incubation:2.3)。
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