|
本研究では、ES細胞をランダムに分化させ、心筋に特異的な表現形を持つもの細胞だけを選択的に採取し、虚血心筋障害部へ移植することを目指した。
[ES細胞分化誘導と心筋型細胞の選択] embryoid bodyの中で、ES細胞が心筋に分化している部位では、心筋特異的な筋線維であるα-myosin heavy chainが発現していると考え、あらかじめこのα-myosin heavychainのpromoterの下流に蛍光蛋白であるEGFPのcDNAとIRESでつないだpuromycin耐性遺伝子を組み込んだ導入遺伝子を作製し、これを導入したES細胞をLIFの非存在下で培養し、embryoidbodyを形成させ、その一部が自律的に拍動することを確認した。一部の拍動部に一致してEGFPの蛍光を認めたが、フローサイトメトリーにて、α-MHC promoterが働いている細胞の分画を同定することはできず、また種々の濃度のpuromycinによって、拍動細胞だけを選択的に得ることもできなかった。
ES細胞から心筋細胞へ分化させるマスター遺伝子が明らかとなっていない現在、本研究のように、ES細胞をランダムに分化させ、様々な細胞になった中で心筋に特異的な表現形を持つ細胞だけを選択的に採取する戦略は、次善の策と考えられたが、ES細胞特有の複雑な遺伝子のon/off調節機構によって、導入した遺伝子をも不活化された可能性があり、想定した結果が得られなかった要因と考えられる。推測される調節機構として、promoter領域のメチル化によってpromoter活性が低下することが知られている。
[Rat 心筋障害モデル作製]左室前壁部に凝固壊死部を作成し、採取した心標本の病理組織学的変化した、傷害部が非貫通性の組織障害のため心室瘤とはなり得ないための至適条件を検討中である。また心機能評価のため、デジタル3次元超音波偏位測定システムを用い局所壁運動を解析中である。
|
