| 研究課題/領域番号 |
12470273
|
|---|
| 研究機関 | 大阪大学 |
|---|
研究代表者 |
白倉 良太 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (00116047)
|
|---|
| 研究分担者 |
村上 博 日本ハム, 中央研究所, 研究員
岡部 勝 大阪大学, 遺伝情報実験施設, 教授 (30089875)
宮川 周士 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (90273648)
|
|---|
| キーワード | NK細胞 / HLA-E / HLA-G1 / β2 microglobulin / ブタ血管内皮細胞 |
|---|
| 研究概要 |
ヒトNK細胞の機能を制御する方法として、ヒト組織適合性抗原HLAのclass Ib群であるHLA-G,Eが重要視されている。これらの分子とその発現に重要とされるβ2microglobulin(B2m)をCHO細胞、ブタ血管内皮(MYP30)に発現させ、ヒトNK細胞に対する細胞傷害抑制効果を判定した。NK細胞としては、ヒト抹消血単核球細胞と京大ウイルス研のYT細胞を用いた。細胞傷害活性の判定には51Crを用いた。
まず、HLA-G1に関しては、数種類あるバリアントのうちHLA-G1とHLA-G3をクローニングし、発現ベクターpCAGGSに組み込んだ。つぎに、これらの遺伝子をCHO細胞、ブタ血管内皮細胞ヘトランスフェクションし、ネオマイシンでセレクションをかける事で、それぞれ安定発現株を得た。
HLA-G1の発現に関してはB2mをco-transfectionすることで増加することが判明した。また、HLA-G1
CHO歯細胞、ブタ血管内皮細胞上でヒトNK細胞による細胞障害を最大約50%の抑制した。
HLA-G3に関しては、naibeな遺伝子の状態ではCHO細胞、ブタ血管内皮細胞にほとんど発現しなかった。そこで、signal peptide部分をHLA-Gとでいれかえたhybrid molecule(HLA-GE)を構築し検討した。このHLA-GE分子はNkcellによる細胞障害を最大約50%抑制した。
|
