| 研究概要 |
<背景>我々はこれまでに、heat shock protein 70 (hsp70) promoterによりLacZ reporter geneを発現するconstruct (hsp70/LzcZ)を作成し、これをhuman glioma cell lines (U251-MG,T98G,NP1,NP2)及びmouse 203 glioma cell lineに導入しstable transfectantを得た後、加温(41℃2時間、42℃1時間、43℃1時間)後3〜72hのβ-galactosidaseの発現を測定した。その結果、主に加温3〜24時間後をピークとする発現を認めた。しかし、細胞株により発現程度の相違が見られ、U251-MG細胞では、37℃でも発現がみられた。
<方法>上記結果を踏まえ今年度は、抗腫瘍性サイトカインであるIFN-γを、heat shockをswitchとして発現させるため、hsp70 promoterによるconstruct (hsp70/IFN-γ)を作成した。それをinuvitroで、株化細胞(mouse 203 glioma cell)にlipofection法により遺伝子導入し、stable transfectant (hsp70/IFN-γ/203)を樹立した。この遺伝子導入細胞を用いて、42℃1時間の加温後(12,24,48,72時間)の培養上清中IFN-γの発現変化を、ELISA法にて測定し、37℃controlのそれと比較検討した。
<結果>IFN-γは加温24時間後に最も強力に発現した。37℃では、発現を認めなかった。
<結論>mouse glioma 203細胞での、hsp70 promoterによるIFN-γの発現は、37℃では、発現を認めない一方、42℃1時間加温により直後〜24時間後にピークをもつ発現を示し、heat shockをswitchとするheat-inducible gene therapyとして有用な可能性が示された。
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