ゲルゾリン遺伝子およびRas抑制変異体を用いた膀胱癌に対する遺伝子治療の樹立

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12470326
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 篠原 信雄 北海道大学, 医学部・附属病院, 講師 (90250422)
• 研究分担者: 葛巻 暹 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 教授 (80091445)
• キーワード: 膀胱癌細胞株 / ゲルゾリン / 遺伝子治療 / ras抑制変異体 / 発現制御 / 膀胱内注入 / 効果増強

研究概要

(1)ゲルゾリン遺伝子を用いた遺伝子を用いた遺伝子治療およびその作用増強効果
ヌードマウスの膀胱癌同所移植モデルを用い、ゲルゾリン遺伝子を経尿道的に膀胱内に注入することで、腫瘍増殖を抑制できるか検討した。その結果、ヒト膀胱癌細胞株2株において増殖抑制がin vivoで証明された。ついで、その作用増強を図るため、ヒト膀胱癌におけるゲルゾリン発現の調節機構について検討した。その結果、膀胱癌ではゲルゾリン遺伝子の発現がそのpromotor lesionのメチル化ではなく、アセチル化により制御されていることを証明した。トリコスタチン投与によりヒストンがアセチル化され、ゲルゾリン蛋白質の膀胱癌細胞内での発現は亢進し、in vitroで増殖抑制が確認された。現在、ヌードマウスの膀胱癌同所移植モデルを用い、ゲルゾリン遺伝子を用いた遺伝子治療の効果増強がはかれるかどうか検討中である。
(2)N116Y遺伝子を用いた遺伝子治療の効果増強
同様のヌードマウスの膀胱癌同所移植モデルを用い、ras抑制変異体N116Yを経尿道的に膀胱内に注入することで、腫瘍増殖を抑制できるか検討した。その結果、ヒト膀胱癌細胞株2株において、これら細胞の著明な増殖抑制が得られ、この遺伝子を用いた遺伝子治療の可能性が証明された。ついでCisplatinを用いることでN116Y遺伝子治療の効果増強についてin vitroで検討したが、in vitroではN116Y遺伝子自体が非常に殺細胞効果が強く、解析できなかった。一方、ヌードマウス膀胱へのアデノウイルスベクターの導入効率の改善のため、実際のモデルでのアデノウイルスの分布について解析した。その結果、アデノウイルスベクターはヒト膀胱癌細胞のnest周辺で強く導入されていたが、その効率増強には、癌細胞移植早期にアデノウイルスベクターを注入する必要があると考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Shinohara N., et al.: "Ras-signal transduction in carcinogenesis and progression of bladder cancer : Molecular target for the treatment?"Urologic Research. (in press).
• [文献書誌] Watanabe T., et al.: "Adenovirus-mediated gene therapy for bladder cancer in an orthotopic model using a dominant negative H-ras mutant"International Journal of Cancer. 92(5). 712-717 (2001)
• [文献書誌] Watanabe T., et al.: "An improved intravesical model using human bladder cancer cell lines to optimize gene and other therapies"Cancer Gene Therapy. 7(12). 1575-1580 (2000)
• [文献書誌] Watanabe T., et al.: "Significance of the Grb2 and son of sevenless (Sos) proteins in human bladder cancer cell lines"IUBMB Life. 49(4). 317-320 (2000)
• [文献書誌] Watanabe T., et al.: "Suppressive effects of dominant negative ras mutant N116Y on transformed phenotypes of human bladder cancer cells"Cancer Letter. 149(1-2). 195-202 (2000)