| 研究概要 |
p19^<ARF>(ヒトではp14^<ARF>なので以下p14^<ARF>)はp53分子分解に促進的に働くMDM2に結合し,その機能を阻害する.その結果,p53遺伝子が正常である場合にもp14^<ARF>遺伝子に異常があればMDM2によりp53が分解されその機能が発現できないことになる.本研究では泌尿器科癌でのp14^<ARF>の遺伝子異常の有無,mRNAの発現について検討を行った.
1.膀胱癌細胞株についてのRT-PCRによるp14^<ARF> mRNAの発現の検討
T24およびHT1376では発現を認めたが,RT4では認められず,homozygous deletionによると思われた.
2.腎細胞癌細胞株についてのRT-PCRによるp14^<ARF> mRNAの発現の検討
ACHN,KRC/YではmRNAの発現を見たが,他の細胞株では発現は見られなかった.
3.腎細胞癌細胞株についてのDNAを鋳型としたPCR
次にhomozygous deletionを含めた遺伝子異常の検討のためにDNAを鋳型としたPCRにより,Exon1beta,Exon2の各領域について5組のプライマーにて検討した.この結果,3株で双方の遺伝子領域に欠失があることが示唆された.
4.定量的PCRを用いたhomozygous deletionの検討
臨床検体についてhomozygous deletionを定量的PCRにより検討するために,2ステップPCRで増幅可能なプライマーの作成をExon2について行った.この結果,preliminaryな結果ではあるが,臨床検体の中にもhomozygous deletionが示唆されるものが見いだされた.
5.p14^<ARF>発現ベクターのp14^<ARF>発現のrestoration
発現ベクターpBabepuroにp14^<ARF>をサブクローニングしたものをp14^<ARF>欠失細胞株に同遺伝子を導入した.
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