子宮内膜症組織に特異的発現をする遺伝子群の解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12470346
• 研究機関: 大阪市立大学
• 研究代表者: 深山 雅人 大阪市立大学, 医学部, 助手 (50305629)
• 研究分担者: 川村 直樹 大阪市立大学, 医学部, 講師 (30254410) ; 本田 謙一 大阪市立大学, 医学部, 助手 (40244644) ; 田中 哲二 大阪市立大学, 医学部, 講師 (80275255) ; 平井 光三 大阪市立大学, 医学部, 助手 (00305616)
• キーワード: 子宮内膜症 / 子宮腺筋症 / 子宮内膜 / サイトカイン

研究概要

子宮内膜症病変における遺伝子発現異常分子を同定することは子宮内膜症の発症機構の解明につながるが、病巣組織が極めて微量であるために、子宮内膜症病変由来不死化細胞を樹立し無限の細胞入手を可能にして遺伝子解析を行う方法と、病変の微量組織に再現性と定量性の高い遺伝子増幅法処置を行った後に特異性の高い遺伝子解析を行う方法のふたつが成功を期待できる子宮内膜症の遺伝子解析と考えられる。この研究費申請研究では、内膜症由来不死化細胞を樹立しconventional cDNA libraryを作製しsubtractive cDNA cloningあるいはdifferential display法によるcDNA cloningを行う方法と、内膜症病変から直接にcDNA libraryを作ることによりdifferential display法によるcDNA cloningを行う方法のふたつの方法を導入し、遺伝子クローニングを行うことである。現在は遺伝子libraryの作製に専心中である。疾患特異的な遺伝子の同定は成功していないが、研究過程で樹立した内膜症由来培養細胞を用いての細胞学的解析を研究経過の報告とした。
手術時に採取した内膜症腹膜病変組織、正常中皮組織、正所性子宮内膜細胞をin vitro培養し、SV40 largeT抗原遺伝子導入により不死化させ、単一細胞由来不死化細胞株を樹立してきている。不死化子宮内膜症細胞の細胞生物学的諸性質の解析を行った。一部の不死化子宮内膜症細胞を用いて疾患特異的に発現が変動する遺伝子のDifferental display法による選別を行ってきた。しかし、まだ研究途上にて、明確な子宮内膜症特異遺伝子を同定するには至っていない。
一方で、子宮内膜症腹膜病変、同患者の正常腹膜、同患者の正所性子宮内膜組織からそれぞれRNAを抽出し、random hexamerを用いてcDNA libraryを作製を試みてきたが、スクリーニングの価値ある大きさのpair cDNA library作製にはまだ成功していない。

研究成果

• [文献書誌] Sakamoto T,Tanaka T, et al.: "Epidermal growth factor inhibits 8-Br-cAMP-induced decidualization of human endometrial stromal cells."Hormone Research. 53. 294-299 (2000)
• [文献書誌] Tanaka T and Umesaki N: "Cytokine regulation of apoptotic susceptibility in a human endometrial epithelial cell line."Jorunal of Reproductive Immunology. 47. 105-119 (2000)
• [文献書誌] Tanaka T,Umesaki N, et al.: "Altered sensitivity to anti-endometriosis medicines in an adenomyosis patient with thyroid dysfunction."Gynecological Endocrinology. 14. 388-391 (2000)
• [文献書誌] Tanaka T, et al.: "Human endometrial stromal interleukin-1 β : Autocrine secretion and inhibition by interleukin-1 receptor antagonist."Hormone Research. 53. 300-304 (2000)
• [文献書誌] Tanaka T,Miyama M, et al.: "Production and physiological function of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) in non-pregnant human endometrial stromal cells."Gynecological Endocrinology. 14. 399-404 (2000)
• [文献書誌] Miyama M,Tanaka T, et al.: "Proliferation and differentiation of human endometrial stromal cells : Impact of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF)"Journal of Fertilization & Implantation. 18. 78-81 (2001)