| 研究課題/領域番号 |
12470372
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
小児外科学
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
大沼 直躬 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (50125910)
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| 研究分担者 |
橋都 浩平 東京大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (50180815)
林 富 東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (40125638)
佐々木 文章 北海道大学, 大学院・医学研究科, 教授 (40178661)
中川原 章 千葉県がんセンター, 生化学研究部, 部長 (50117181)
檜山 英三 広島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教授 (00218744)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2003
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| キーワード | 肝芽腫 / β-カテニン / cDNAプロジェクト / テロメラーゼ / MDR1 / P-gp |
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| 研究概要 |
日本小児肝癌スタディーグループ(JPLT)で中央管理されている68例の凍結検体を用い、β-カテニン遺伝子とAPC遺伝子の変異解析を中心に研究を行った。この結果、65%にβ-カテニンのexon 3に遺伝子変異を認めた。APC遺伝子には異常は認められなかった。変異β-カテニン蛋白のターゲットと目されるサイクリンD1の発現をreal-time RT-PCRで48症例において半定量したところ、サイクリンD1は遺伝子変異をもつ肝芽腫で、有意にその発現が高いことが明らかになった。肝芽腫の新しい診断、治療法を開発することを目的としてcDNAプロジェクトをおこなった。肝芽腫および小児正常肝のcDNA libraryを作製してそれぞれ9000、3000クローンずつのエンドシークエンスを行った。クローニングされた遺伝子をプローブとして、半定量RT-PCRによるdifferential screeningを行い、肝芽腫と小児正常肝での発現差を明らかにした。肝芽腫48例を対象とし、ヒトテロメラーゼのcatalytic componentであるhTERTの発現レベルを定量した。テロメラーゼ活性、hTERT発現量は病期の進行とともに、高発現腫瘍が増加し、死亡例で有意にテロメラーゼ活性度、hTERT発現量が高く、肝芽腫の悪性度の指標になる可能性が示唆された。肝芽腫症例6例を対象にP-gp抗体を用いた免疫染色により発現を解析検討したところ、P-gpの発現は非腫瘍肝では全体に均一に細胞膜に認められた。RT-PCRの解析では、CMOATは48例中22例に発現が認められたが、特定の傾向は認められなかった。MDR1は、48例中13例で発現を認め、化学療法を受けた後の検体で、発現している頻度が高かった。
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