| 研究課題/領域番号 |
12470384
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
岩本 容泰 大阪大学, 大学院・歯学研究科, 講師 (30223431)
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| 研究分担者 |
樋口 義信 中外製薬株式会社, 創薬研究所, 主査(研究職)
豊澤 悟 大阪大学, 大学院・歯学研究科, 講師 (30243249)
岩本 資己 大阪大学, 大学院・歯学研究科, 講師 (80203644)
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| キーワード | 軟骨形成 / 成長軟骨 / 内軟骨性骨化 / 永久軟骨 / erg / 転写調節因子 |
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| 研究概要 |
本研究の目的は、成長軟骨と関節軟骨組織にそれぞれドミナントに発現するEts related geneの作用および発現制御機構を解析して、異なる運命をたどる両軟骨組織の発生機構を解明することである。平成12年度は、c-ergおよびC-1-1の機能ドメインのマッピングを行なった。c-ergおよびC-1-1のDNA結合ドメイン(EDB:Ets DNA binding domain)の5'側あるいは3'側より種々の長さの領域を欠損させた変異体(deletion mutant)を作成した。そして、ergの標的遺伝子のひとつである、コラゲナーゼIのプロモーターをホタルルシフェレースをレポーターとするレポーターplasmidを作成して、様々なc-ergおよびC-1-1の変異体(deletion mutant)とともに軟骨細胞あるいは線維芽細胞に導入した。レポーター遺伝子の発現レベルを測定した結果、c-ergとC-1-1の転写活性発現にはEDBの3'側の領域が必須であった。c-ergとC-1-1のC端の20アミノ酸には3つのチロシン残基があり、この部位は、種を通じて保存されている。したがって、c-ergおよびC-1-1の転写促進活性発現に同部のリン酸化が関わる可能性がある。また、c-ergとC-1-1はEDBの5'側の81bp部分の有無が異なっているが、本レポーターアッセイ系では、両isoforms間では、明確な転写活性の差異を検出できなかった。そこで、軟骨組織内でのc-ergおよびC-1-1の標的遺伝子である可能性の高いテナスチンCのプロモーターを用いて、新たにレポーターplasmidを作成し、現在、同レポーターplasmidを用いて再度機能ドメインのマッピングを行なっている。また、マウスEts related geneのクローニングを開始した。これまで、3種類のisoformsを分離している。
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