| 研究課題/領域番号 |
12470464
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
井上 昌一 鹿児島大学, 歯学部, 教授 (30028740)
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| 研究分担者 |
佐藤 節子 鹿児島大学, 歯学部・付属病院, 講師 (70145514)
伊藤 博夫 鹿児島大学, 歯学部, 助教授 (40213079)
北田 勝浩 鹿児島大学, 歯学部, 助手 (90195264)
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| キーワード | 感染性心内膜炎 / 口腔細菌 / 細胞外基質タンパク質 / フィブロネクチン / 遺伝子クローニング / DNAライブラリー / 発現ライブラリー |
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| 研究概要 |
栄養要求欠陥レンサ球菌(nutritionally variant streptococci : NVS)は感染性心内膜炎の原因菌としてしばしば分離される口腔常在菌であり、そのフィブロネクチン(Fn)付着能と宿主心内膜への定着能との関連性が示唆されている。主要な口腔常在NVSであるGranulicatella(Abiotrophia) adiacensのFn付着因子タンパク質遺伝子をクローニングするために、ATCC49175株より抽出した染色体DNAを制限酵素XbaIで消化して得られたDNA断片をpUC19ベクターに組込み、Echerichia coli TOP10株を用いて発現ライブラリーを構築した。組み換えE. coliクローンを次々と単離し、菌体を界面活性化剤で可溶化し、これをFnを固相化したマイクロプレートに反応させ、非結合物質の洗浄除去後、Fnに結合した物質を変性剤添加緩衝液で解離させてSDS-PAGEで特異タンパク質の存在を評価した。Fnに結合するタンパクを産生する複数のクローンが得られたが、その中で明確な結合性を示す約75kDaのタンパクを発現するクロムーンNo.45について、確かに当該物質がG. adiacensに由来することが確認でき、その遺伝子配列の大部分が決定できた。得られた部分DNA配列情報に基づいてデータベース上の既知物質との相同性検索を行ったところ、類似物質は発見されず、これが新規物質である可能性が示唆された。次いで本タンパク質の精製法を確立し、この精製タンパクを動物に免疫して特異抗体の作製を行っている。この特異抗体を利用して本タンパク質のG. adiacens ATCC 49175株細菌細胞における局在、ならびにその生理病理学的意義の解明を、全遺伝子配列の決定と平行して進めていく。
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