2002 年度実績報告書

固相集積プローブによる薬物受容体の高速・高感度光アフィニティーラベリング

研究課題

研究課題/領域番号	12470504
研究機関	富山医科薬科大学
研究代表者	畑中保丸富山医科薬科大学, 薬学部, 教授 (30111181)
研究分担者	手塚康弘富山医科薬科大学, 和漢薬研究所, 助教授 (70236975)
キーワード	光アフィニティーラベル / ジアジリン / 固相合成 / プローブライブラリー / DNA / ペプチド / プロテオミクス / 構造生物学
研究概要	薬物-受容体蛋白質相互作用系の解析は、分子系生命科学の先端的重要課題の一つである。光アフィニティーラベル法は、この相互作用系を共有結合で瞬時・非可逆的に固定し、リガンド結合部位を知る化学的な直接解析法である。しかし、従来法は解析に多くの時間と労力が必要であり、ポイントミューテーション等の遺伝子操作による間接的解析法に比べて開拓が遅れていた。ごく最近、申請者による非放射性の「光アフィニティービオチン化法」により解析過程が大幅に効率化され、光アフィニティーラベル法による高速解析への端緒が開かれた。本研究では、固相上に集積した高速解析用光アフィニティープローブを新たに開発し、最先端の質量分析法によるフェムトモル量の微量配列解析と組み合わせて、従来法を大きく超えるこれまでにない効率的方法論の開拓を目的とする。本年度は次の3点を主に検討し目的としていた成果を得た。 1.光反応性アミノ酸の不斉合成:昨年度の成果である、光反応性のフェニルアラニン合成法を基礎に、不斉反応により対応する光学活性体の大量合成法を確立し、これを用いるペプチド合成への実用的ルートを確保した。 2.光反応性のペプチドとDNAの合成:昨年度において、固相の材質とラベル後の切断法をほぼ確立したので、本年度はこの固相に固定化する光反応性リガンドを用意するため、上述の光反応性フェニルアラニンを用いた光反応性ペプチドと、新たに光反応性のDNAを合成する段階を検討し、ジアジリンを搭載したカルベン発生型のオリゴペプチドとオリゴDNAを簡単に調整する方法を確立した。 3.固相ラベルのKnow-How蓄積:本課題の最終目標である固相高速光アフィニティーラベリングの開拓に向け、固相上での蛋白質補足、切り出し、質量分析装置による高速解析等の諸段階を検討し、方法論確立に必要なKnow-Howの基礎検討を行った。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] M.Hashimoto, Y.Hatanaka, Y.Sadakane, K.Nabeta: "Synthesis of tagintroducible (3-trifluoromethyl)phenyldiazirine based photoreactive phenylalanine"Bioorg. Med. Chem. Lett.. 12. 2507-2510 (2002)
[文献書誌] M.Hashimoto, Y.Hatanaka, K.Nabeta: "Versatile synthesis of phenoxydiazirine based fatty acid analogues and photoreactive galactosylceramide"Bioorg. Med. Chem. Lett.. 12. 89-91 (2002)
[文献書誌] Y.Hatanaka, Y.Sadakane: "Photoaffinity labeling in drug discovery and developments : Chemical gateway for entering proteomic frontier"Curr. Top. Med. Chem.. 2. 271-228 (2002)
[文献書誌] T.Sugimoto, T.Fujii, Y.Hatanaka, S.Yamamura, M.Ueda: "Syntheses of novel photoaffinity probes for bioorganic studies on nyctinasty of leguminous plants"Tetrahedron Lett.. 43. 6529-6532 (2002)
[文献書誌] J.Yang, J.Dowden, A.Tatiboue, Y.Hatanaka, G.D.Holman: "Development of high affinity ligands and photoaffinity labels for the D-fructose transporter GLUT5"Biochem. J.. 367. 533-539 (2002)
[文献書誌] T.Ruhl, D.Volke, K.Stembera, Y.Hatanaka, H.Hennig, F.Schumer, P.Welzel: "Isoserine-based biotinylated photoaffinity probes that interact with penicillin-binding protein 1b"Chem. Commun.. 2002. 1630-1631 (2002)
[文献書誌] 畑中保丸: "アフィニティークロマトグラフィー「分析化学II(Integrated Essentialsシリーズ)改訂第5版」(山口,升島,斉藤編)"230-242 南江堂 (2002). 230-242 (2002)

2002 年度 実績報告書

固相集積プローブによる薬物受容体の高速・高感度光アフィニティーラベリング

研究代表者

畑中 保丸 富山医科薬科大学, 薬学部, 教授 (30111181)

研究成果

[文献書誌] M.Hashimoto, Y.Hatanaka, Y.Sadakane, K.Nabeta: "Synthesis of tagintroducible (3-trifluoromethyl)phenyldiazirine based photoreactive phenylalanine"Bioorg. Med. Chem. Lett.. 12. 2507-2510 (2002)

[文献書誌] M.Hashimoto, Y.Hatanaka, K.Nabeta: "Versatile synthesis of phenoxydiazirine based fatty acid analogues and photoreactive galactosylceramide"Bioorg. Med. Chem. Lett.. 12. 89-91 (2002)

[文献書誌] Y.Hatanaka, Y.Sadakane: "Photoaffinity labeling in drug discovery and developments : Chemical gateway for entering proteomic frontier"Curr. Top. Med. Chem.. 2. 271-228 (2002)

[文献書誌] T.Sugimoto, T.Fujii, Y.Hatanaka, S.Yamamura, M.Ueda: "Syntheses of novel photoaffinity probes for bioorganic studies on nyctinasty of leguminous plants"Tetrahedron Lett.. 43. 6529-6532 (2002)

[文献書誌] J.Yang, J.Dowden, A.Tatiboue, Y.Hatanaka, G.D.Holman: "Development of high affinity ligands and photoaffinity labels for the D-fructose transporter GLUT5"Biochem. J.. 367. 533-539 (2002)

[文献書誌] T.Ruhl, D.Volke, K.Stembera, Y.Hatanaka, H.Hennig, F.Schumer, P.Welzel: "Isoserine-based biotinylated photoaffinity probes that interact with penicillin-binding protein 1b"Chem. Commun.. 2002. 1630-1631 (2002)

[文献書誌] 畑中保丸: "アフィニティークロマトグラフィー「分析化学II(Integrated Essentialsシリーズ)改訂第5版」(山口,升島,斉藤 編)"230-242 南江堂 (2002). 230-242 (2002)

2002 年度実績報告書

畑中保丸富山医科薬科大学, 薬学部, 教授 (30111181)

[文献書誌] 畑中保丸: "アフィニティークロマトグラフィー「分析化学II(Integrated Essentialsシリーズ)改訂第5版」(山口,升島,斉藤編)"230-242 南江堂 (2002). 230-242 (2002)