インテグリンを介するシグナル伝達の制御機構とその多様性に関する研究

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12480189
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 関口 清俊 大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (50187845)
• 研究分担者: 李 紹良 大阪大学, 蛋白質研究所, 助手 (40252720) ; 顧 建国 大阪大学, 蛋白質研究所, 助手 (40260369)
• キーワード: インテグリン / ラミニン / 細胞接着 / CD151 / 細胞骨格 / 基底膜 / 細胞外マトリックス

研究概要

新規基底膜ラミニンアイソフォームの精製のその機能解析:成体基底膜(特に血管基底膜)の主要な接着分子であるラミニン-10/11(LN-10/11)を精製し、その生理活性をインテグリンを介するシグナル伝達に注目して解析し、以下の成果を得た。(1)LN-10/11はフィブロネクチン(FN)より強く細胞の移動を促進し、その細胞移動はインテグリンα3β1依存的であった。(2)FNに接着した細胞では典型的なストレスファイバーや接着斑が明瞭に観察されたが、(1)LN-10/11に接着した細胞ではストレスファイバーや接着斑がほとんど認められなった。(3)LN-10/11に接着した細胞では強いRacの活性化が検出されたが、Rhoはほとんど活性化されなかった。逆に、FNに接着した細胞では強いRhoの活性化が検出されたが、Racは僅かしか活性化されていなかった。(4)LN-10/11上での細胞移動やRacの活性化はCrkIIのSH2またはSH3変異蛋白質によって阻害された。
インテグリンα3β1と結合するCD151の機能解析:インテグリンα3β1と強く会合する分子量30kDの膜蛋白質を同定し、これがCD151であることを見いだした。CD151に機能を解析するため、GFPタグをつけたCD151の強制発現系を構築し、これが細胞-細胞間接着部位に局在化することを確認した。また、CD151のC末端側22アミノ酸残基を欠失させると、細胞表面に局在化できないことがわかった。また、CD151遺伝子欠損マウスを作成するためのターゲティングベクターを構築した。

研究成果

• [文献書誌] Kikkawa,Y et al.: "Integrin binding specificity of laminin-10/11 : laminin-10/11 are recognized by a3b1, a6b1, and a6b4 integrins."J.Cell Sci.. 113. 869-876 (2000)
• [文献書誌] Naito,M. et al.: "The domains of human fibronectin mediating the binding of alpha antigen, the most immunopotent antigen of mycobacteria that induces protective immunity against mycobacterial infection."Biochem.J.. 348. 725-731 (2000)
• [文献書誌] Satoi,S. et al.: "Increased extra domain A-containing fibronectin and hepatic dysfunction during septic response."Shock. 13. 492-496 (2000)
• [文献書誌] Fleischmajor,R. et al.: "Differential expression of laminin a chains during proliferative and differentiation stages of skin morphogenesis."Matrix Biol.. 19. 637-647 (2000)
• [文献書誌] Fujiwara,H. et al.: "Purification and characterization of human laminin-8 : laminin-8 stimulates cell adhesion and migration through a3b1 and a6b1 integrins."J.Biol.Chem.. (in press). (2001)
• [文献書誌] Matsui,Y. et al.: "Alternative splicing of fibronectin transcripts in osteochondrogenic tumors."Anticancer Res.. (in press). (2001)