| 研究概要 |
本年度は1年目であり,フィチン酸金属錯体の溶液中での存在形態(pHおよび濃度依存性)の解明,フィチン酸加水分解酵素フィターゼ酵素活性の金属イオン依存性の調査,金属錯体の生理活性試験法の開発,等の基礎的知見を得た。
1.フィチン酸金属錯体の溶液中での存在形態解明
フィチン酸と,各種金属イオン(Na^+,K^+,Li^+,Mg^<2+>,Ca^<2+>,Mn^<2+>,Cu^<2+>,Zn^<2+>)との結合能をpH滴定により調べ,存在種と安定度定数を決定した。錯形成はすべての金属について錯体の電荷が-5になった時から始まっており,静電的な影響を大きく受けていることが判明した。また,M/L=3まで水溶性の単量体錯体を形成すること,大きな安定度定数を示すことも判明し,水溶液中で安定な金属錯体として存在することが明らかとなった。安定度定数の比較から錯体構造としてリン酸-金属-リン酸構造が推定され,P31-NMRからも支持された。
2.フィチン酸加水分解酵素フィターゼ酵素活性の金属イオン依存性
精製フィターゼを用いた反応速度は大きな金属イオン依存性を示し,フィターゼが金属錯体を基質とし,金属イオン活性化酵素であることが判明した.1項で確立されたフィチン酸金属錯体とその構造の情報を基に,反応基質の同定に成功した。
3.金属錯体の生理活性試験
抗癌作用を目的とした生理活性試験を行い,某研究所でのデータと同じ結果が得られることを確認し,生理活性試験の信頼性を確認した。予備実験では,生理活性が確認できた。
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