| 研究概要 |
近年,遺伝子組み換え作物が草本植物を中心に利用されるようになってきた.しかしながら,木本植物の果樹類では,形質転換体の商業的な栽培は,我が国はもとより諸外国においても行われていない.本研究の目的は,我々がこれまでに茎頂培養から形質転換系までの組織培養系を確立してきたカキを材料に,遺伝子組み換え個体の商業的利用の場面を想定して,形質転換体を作出し,圃場で栽培して評価することにある.本年度は,当初の研究計画に従って,圃場栽培試験に供する系統の選抜と選抜された系統の大量増殖法について検討した.
まず圃場栽培試験に供する系統についてであるが,本年度は,土壌細菌Arthrobacter globiformis由来のコリン酸化酵素遺伝子を導入した形質転換系統について調査した.まずゲノムDNAのサザンブロット分析を行い組み込まれたT-DNAのコピー数などを調査した.引き続いて,葉中のコリン酸化酵素タンパク質含量をイムノブロット分析により推定した.さらに,葉中のグリシンベタイン含量をNMRにより測定した.これらの分析結果より,最終的にシングルコピーのT-DNAが組み込まれ,葉中のコリン酸化酵素タンパク質ならびにグリシンベタイン含量の高い系統を選抜した.これらの系統に,インキュベータ内で塩処理を行い,葉のクロロフィル蛍光(Fv/Fm)を測定したところ,耐塩性が増強されていることが確認された.そこでこれら系統を圃場栽培試験に供する系統の候補にすることに決定した.
次に,大量増殖法についてであるが,緑枝挿しについて検討した.組織培養により繁殖した自根苗を地際部まで切り戻し,生じたひこばえを葉芽挿しにより繁殖することで,一度に大量の苗木が得られ,十分な発根量が得られることが明らかになった.
以上の結果をふまえて,カリフォルニア大学デービス校を訪問し,形質転換体の栽培試験を行うために必要な調査を行った.
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