脂肪細胞由来の血中アディポサイトカインを指標にした動物体脂肪の測定法の開発

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12556047
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 斉藤 昌之 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (80036441)
• 研究分担者: 本庄 勉 (株)森永生科学研究所, 製造開発部長(研究職) ; 木村 和弘 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助教授 (30192561)
• キーワード: 体脂肪 / レプチン / アディポサイトカイン / イヌ / ネコ / cDNA / ELISA / 肥満

研究概要

アディポサイトカインとは脂肪細胞で合成され血中に分泌されるタンパク質の総称である。本研究の目的は、血中に存在するアディポサイトカインによって伴侶動物と家畜の体脂肪を簡便にかつ定量的に測定する方法を確立し利用することである。代表的なアディポサイトカインであるレプチンについて、昨年度までにイヌのレプチンcDNAをクローニングし抗体を利用した免疫学的測定法ELISAを開発し、血中レプチン濃度が体脂肪含量と高い正の相関を示し、犬種や性別、年齢に拘わらずに肥満度の定量的評価に利用出来ることを明らかにした。そこで本年度は、ネコのレプチンについても同様の検討を行い、以下の成果を得た。
1、ネコの脂肪組織から抽出したmRNAからレプチンcDNAを得て、その塩基配列を決定した。それから推定されるアミノ酸配列は、イヌやマウス、ラット、ヒトと80%以上の高い相同性があった。
2、上記でクローニングしたネコレプチンcDNAを大腸菌に導入し、16kDaの組み替えレプチンタンパク質を得た。これをラットレプチン受容体を発現する細胞に作用させたところ、STAT3のリン酸化が誘発されたので、生物活性を持つことが確認された。
3、上記組み替えネコレプチンをウサギに免役し、特異抗体を得た。その反応性を確認した上で、ELISA測定系を作成した。それを利用して、健康な28頭のネコの血中濃度を測定したところ、0.4-17.5ng/ml(平均3.4±0.7ng/ml)であり、体脂肪率と正の相関が認められた。
これらの結果から、イヌと同様にネコでも血中レプチンが体脂肪量を反映する指標となることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Sagawa, M.M., Nakadomo, F., Honjoh, T., Ishioka, K., Saito, M.: "Correlation between plasma leptin concentration and body fat content in dogs"Am. J. Vet. Res.. 63. 7-10 (2002)
• [文献書誌] Ishioka, K., Kanehira, K., Sasaki, N., Kitamura, H., Kimura, K., Saito, M.: "Canine mitochondrial uncoupling proteins: structure and mRNA expression of three isoforms in adult beagles"Comp. Biochem. Physiol. B. 131. 483-489 (2002)
• [文献書誌] Ishioka, K., Soliman, M., Kimura, Saito, M.et al.: "Experimental and clinical studies on plasma leptin in obese dogs"J. Vet. Med. Sci.. 64. 349-353 (2002)
• [文献書誌] Kitamura, T., Kimura, K., Jung, B.D., Makondo, K., Sakane, N., Yoshida, T., Saito, M.: "Proinsulin C-pepticd activates cAMP response element-binding proteins through the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in mouse lung capillary endothelial cells"Biochem. J.. 366. 737-744 (2002)
• [文献書誌] Soliman, M., Ishioka, K., Kimura, K., Saito, M.et al.: "Serum leptin levels during the periparturient period in cows"J. Vet. Med. Sci.. 64. 1053-1056 (2002)
• [文献書誌] Ishioka, K., Soliman, M.M., Honjoh, T., Shibata, H., Kimura, K., Saito, M.: "Dexamethasone increases serum leptin concentration"Vet. J.. 164. 295-297 (2002)