2001 年度実績報告書

BACシステムを用いた簡便な組み換えヘルペスウイルス作成法の開発

研究課題

研究課題/領域番号	12556049
研究機関	東京医科歯科大学
研究代表者	川口寧東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教授 (60292984)
研究分担者	前田健山口大学, 農学部, 助教授 (90284273) 堀本泰介東京大学, 医科学研究所, 助教授 (00222282) 見上彪日本大学, 生物資源科学部, 教授 (20091506) 坂口正士 (財)化学及び血清療法研究所, 第2研究部, 上級研究員
キーワード	ヘルペスウイルス / 組み換え法 / BAC system
研究概要	本研究の目的はヘルペスウイルスの組み換え技術をbacterial artificial chromosome (BAC) system"を用いて簡便な組み換え法を開発することによってヘルペスウイルスの新しいワクチン開発、遺伝子治療ベクターの開発、基礎研究を著しくスピードアップするこことにある。本年度に得られた結果は以下の通りである。ヘルペスウイルスで最も研究が進んでいる単純ヘルペスウイルス(HSV)のBAC systemを用いた組み換え法の確立を試みた。外来遺伝子の挿入によって影響がでない部位であるUL3とUL4のジャンクション部位にBACmidを挿入した組み換えHSVであるYK301を構築し、YK301ゲノムを保持した大腸菌YEbac101の作製に成功した。YEbac101由来のHSVゲノムをRSCに導入したところ感染性HSV(YK302)の産生が確認された。YK302は、TKを欠損しているがTK欠損野生株Δ305と培養細胞において同等な増殖能力を有していた。YK302のTK領域の修復に成功し、YK303を得た。また、YK303のゲノムを保持する大腸菌(YEbac102)の作製に成功した。YEbac102由来のHSVゲノムをRSCに導入したところ、感染性HSV(YK304)の産生が確認されYK304は野生株と培養細胞において同等な増殖能力を有していた。本年度において、如何なるHSV遺伝子も欠損しないゲノムを有する大腸菌(YEbac102)の作製に成功し、YEbac102由来のウイルスは、野生株と同等な性状を有していることが明らかになった。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Y.Kawaguchi et al.: "Herpes simplex virus type 1 α regulatory protein ICPO functionally interacts with a cellular transcription factor BMAL1"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98. 1877-1882 (2001)
[文献書誌] A.Yokoyama et al.: "Identification of major phosphorylation sites of Epstein-Barr virus nuclear antigen leader protein(EBNA-LP) : The function of EBNA-LP to induce latent membrane protein 1 co-operatively with EBNA-2 is regulated by phosphorylation."Journal of Virology. 75. 5119-5128 (2001)
[文献書誌] A.Yokoyama etal.: "The conserved domain CR2 of Epstein-Barr virus nuclear antigen leader protein is responsible not only for nuclear matrix association but also for nuclear 1ocalization"Virology. 279. 401-413 (2001)
[文献書誌] K.Kato, et al.: "Eptain-Barr virus encoded-protein kinase BGLF mediates hyper-phosphorylation of cellular elongation factor 1δ (EF-1δ) EF-1δ is universally modified by conserved protein kinases of herpesviruses"Journal of General Virology. 82. 1457-1463 (2001)
[文献書誌] M.Tanaka, et al.: "The Conserved region CR2 of Epstein-Barr Virus Nuclear Antigen Leader Protein Is a Multifunctional Domain that mediates Self-Association As Well As nuclear Localization and Nuclear Matrix Association"Journal of Virology. (印刷中).
[文献書誌] K.Kato, et al.: "Characterization of the regulatory funetion of the Marek's disease virus serotype 1 ICP22 homologue"Vet. Microbiol.. (印刷中).

2001 年度 実績報告書

BACシステムを用いた簡便な組み換えヘルペスウイルス作成法の開発

研究代表者

川口 寧 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教授 (60292984)

研究成果

[文献書誌] Y.Kawaguchi et al.: "Herpes simplex virus type 1 α regulatory protein ICPO functionally interacts with a cellular transcription factor BMAL1"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98. 1877-1882 (2001)

[文献書誌] A.Yokoyama etal.: "The conserved domain CR2 of Epstein-Barr virus nuclear antigen leader protein is responsible not only for nuclear matrix association but also for nuclear 1ocalization"Virology. 279. 401-413 (2001)

[文献書誌] K.Kato, et al.: "Eptain-Barr virus encoded-protein kinase BGLF mediates hyper-phosphorylation of cellular elongation factor 1δ (EF-1δ) EF-1δ is universally modified by conserved protein kinases of herpesviruses"Journal of General Virology. 82. 1457-1463 (2001)

[文献書誌] M.Tanaka, et al.: "The Conserved region CR2 of Epstein-Barr Virus Nuclear Antigen Leader Protein Is a Multifunctional Domain that mediates Self-Association As Well As nuclear Localization and Nuclear Matrix Association"Journal of Virology. (印刷中).

[文献書誌] K.Kato, et al.: "Characterization of the regulatory funetion of the Marek's disease virus serotype 1 ICP22 homologue"Vet. Microbiol.. (印刷中).

2001 年度実績報告書

川口寧東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教授 (60292984)