慢性関節リウマチ、ウイルス感染症に対する抗核酸抗体遺伝子療法の開発

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12557044
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 佐々木 毅 東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (50110656)
• 研究分担者: 亀岡 淳一 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (30261621) ; 張替 秀郎 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (50302146) ; 北川 良親 秋田県立大学, 生物工学研究所, 教授 (10006752) ; 宗像 靖彦 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (20271950)
• キーワード: 抗核酸抗体 / 人工単鎖抗体 / VH,VL / ヒトT細胞白血病ウイルス / V遺伝子

研究概要

1.RNA-DNAハイブリッドに対する人工単鎖抗体遺伝子の導入.
マウス型抗RNA-DNAハイブリッド抗体のVH,VL鎖遺伝子を用いて作成した。抗単鎖抗体遺伝子をレトロベクターに組み込み、これをヒトT細胞株H9細胞に導入した。この遺伝子を導入した細胞での抗RNA-DNAハイブリッド抗体の発現をフローサイトメトリー法で検出を計った。しかし、現時点で特異蛍光を検出できず、導入した抗単鎖抗体遺伝子がT細胞で充分な抗体産生を行っているか検討中である。
2.抗RNA-DNAハイブリッド抗体の細胞内発現により、ヒトT細胞白血病ウイルスI(HTLV1)の増殖が阻止されるかを検討する条件(マーカー)の設定。
HTLV-1増殖の指標として、HTLV-1mRNAの定量的把握、HTLV-1関連蛋白taxの検出方法の確立を計っている。現時点までにHTLV-1持続感染T細胞株MTI等においてフローサイトメトリーにてtax蛋白発現を検出する系を確立した。現在、ABI1700を用いたリアルタイムTaqmanPCR法によりHTLV-1mRNAの定量的測定のための条件を検討中である。RNA・DNAハイブリッド抗体遺伝子を導入した細胞がHTLV-1感染によるウイルス増殖を阻止できるかについてこのHTLV-1mRNA量、tax発現の阻止を指標として検討していく予定である。
3.ヒト抗-本鎖(ss)DNA抗体産生クロン081のVH,VL遺伝子配列を明らかとし、このVH,VL遺伝子を単離した。0-81VH及びVL遺伝子のリンカー部分を結合することにより抗ssDNA単鎖抗体を発現する系の確立を計っている。

研究成果

• [文献書誌] Rahman,M..,Sasaki,T., et al.: "A repressor element in the 5'-untranslated region of human Pax 5 exon 1A."Gene. 263. 59-66 (2001)
• [文献書誌] Takahashi,M,Sasaki,T, et al.: "Measurement of tumor necrosis factor-α messenger RNA In synovial fibroblasts by real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction."J.Lab.Clin.Med.. 137. 101-106 (2001)
• [文献書誌] Suzuki,Y.,Sasaki,T., et.al.: "Chemically modified ribozyme to V gene inhibits anti-DNA production and the formation of immune deposits caused by lupus lymphocytes."J.Immunol.. 165. 5900-5905 (2000)
• [文献書誌] Funato,T.,Sasaki,T., et al.: "Anti-K-ras rybozyme induced a growth inbibition and an increased chemosensitivity of human colon cancer cells."Cancer Gene Therapy. 165. 495-500 (2000)
• [文献書誌] Funato,T.,Sasaki,T., et.al.: "In vitro leukemia cell models of Ara-C resistance."Leukemia Research. 24. 535-541 (2000)
• [文献書誌] Takahashi,S,Sasaki,T, et al.: "Cloning of a coproporphyrinogen oxidase promoter regulatory element binding protein."Biochem.Biophy.Res.Com.. 273. 596-602 (2000)