循環器感受性遺伝子解析のためのTaqMan PCR法の確立

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12557063
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 勝谷 友宏 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30311757)
• キーワード: 遺伝子多型 / MGBプローブ / 疾患感受性 / SNPs / 高血圧 / TaqManケミストリー / 遺伝疫学 / 多因子疾患

研究概要

DNAチップ技術が注目を集めているが、圧倒的に高頻度である遺伝性多因子疾患、特に本態性高血圧症や糖尿病といった疾患の解析には、統計学的に十分なパワーが要求されることから、多施設での大量検体収集の解析には不向きである。プレDNAチップとして中小規模の施設でも検討可能な遺伝子解析技術の確立が必要であり、定量的RT-PCR(reverse trascriptase PCR)における定量性を高め、Western blottingと同様の信頼性を得ることを目的として開発されたTaq Man PCR法の応用が求められている。本法においてプローブは多形性部位が中心に来るように設計されるが、当該領域がGCリッチであったり、同一塩基が3つ以上続く場合はTaq Manケミストリー法の適応が困難とされる。特に、primerとプローブが同時にアニーリングするため、各primer濃度のバランス、アニーリング温度の設定が重要であり、塩基配列に応じたPCR条件の設定およびMGBプローブの活用が有効であった。本年度は実際にMGBプローブも用いて、3省庁合同のヒトゲノム遺伝子解析の倫理指針に則り収集された検体を用いて、TaqMan PCR法を実施し、大規模集団における遺伝子型決定を行い、複数の血圧関連遺伝子の同定に成功した。具体的には、食塩感受性と関連を示すαアデュシン遺伝子多型や、2種類のプローブの組み合わせによるアポリポ蛋白E遺伝子多型などである。また現在、インベーダー法やパイロシーケンス法などとの比較検討を進めるとともに、頻用されるACE遺伝子のI/D多型のような比較的大きな欠失を同定するためのTaqMan PCR法の確立を図っている。

研究成果

• [文献書誌] Morimoto S, Katsuya T, et al.: "Deletion allele of the angiotensin-converting enzyme gene as a risk factor for pneumonia in elderly patients"Am J Med.. 112. 89-94 (2002)
• [文献書誌] Sugimoto K, Katsuya T, et al.: "Alpha-Adducin Gly460Trp polymorphism is associated with low renin hypertension in younger subjects in the Ohasama study"J Hypertens. 20(9). 1779-1784 (2002)
• [文献書誌] Katsuya T, et al.: "Epsilon 4 allele of apolipoprotein E gene associates with lower blood pressure in young Japanese subjects : the Suita Study"J Hypertens. 20(10). 2017-2021 (2002)
• [文献書誌] Fukuda M, Katsuya T, et al.: "Association of a mast cell chymase gene variant with HDL cholesterol, but not with blood pressure in the Ohasama study"Hypertens Res. 25(2). 179-184 (2002)
• [文献書誌] Matsubara M, Katsuya T, et al.: "Angiotensin-converting enzyme I/D polymorphism and hypertension : the Ohasama study"J Hypertens. 20(6). 1121-1126 (2002)
• [文献書誌] Iwai N, Katsuya T, et al.: "Association between SAH, an acyl-CoA synthetase gene, and hypertriglyceridemia, obesity, and hypertension"Circulation. 105(1). 41-47 (2002)