2003 年度実績報告書

てんかん原性大脳皮質形成異常モデル動物の確立とアンチセンス治療法への展開

研究課題

研究課題/領域番号	12557077
研究機関	浜松医科大学
研究代表者	福田敦夫浜松医科大学, 医学部, 教授 (50254272)
研究分担者	井上浩一浜松医科大学, 医学部, 助手 (80345818) 清水千草日本学術振興会, 特別研究員(PD) 岡部明仁浜松医科大学, 医学部, 助手 (10313941) 上野伸哉浜松医科大学, 医学部, 助教授 (00312158)
キーワード	クロライドイオン / KCC2 / 免疫沈降法 / 細胞移動 / GABA / 皮質形成異常 / yeast two-hybrid法 / グリシン受容体
研究概要	1.focal freeze-lesionモデルの異常層構造形成過程のグリシン受容体発現変化の解析(岡部、清水、福田):グリシン受容体サブユニット(α1-3,β) mRNAの発現パターンをin situ hybridization法を用いて正常大脳皮質で調べたところ、皮質板細胞もCajal-Retzius細胞もα2/βのヘテロであり、受容体密度はCajal-Retzius細胞>皮質板細胞であった。ついでfreeze-lesionの形成異常皮質での発現状態を検討したところ、異常層構造の形成過程である生後4日前後で、lesion部位への移動細胞に著しいα2 mRNAの発現増加が認められた。 2.focal freeze-lesionモデルの異常層構造形成過程のGABA/グリシン作用の生理学的解析(福田、上野):focal freeze-lesionモデルを用いて脳スライス標本を作製し、異常皮質形成過程のlesion部位への移動細胞からグラミシジンパッチクランプ記録を行った。正常部位の錐体細胞に比べGABA逆転電位は脱分極側にシフトし、[Cl^-]_iは上昇していた。ついで、Ca^<2+>イメージング法によってGABA/グリシンによるCa^<2+>上昇部位のスライスでの平面的広がりを観察した。通常ではCa^<2+>上昇の消失後にあたる生後1週においても、異常皮質部位にのみCa^<2+>上昇が認められ、異常層構造の形成過程における興奮性GABA/グリシン作用の関与が示唆された。 3.KCC2結合蛋白質の検索と機能制御の解析(井上、上野、福田):ヒトてんかん原性cortical dysplasia組織で顕著なKCC2発現低下が認められた。そこで、治療法開発への展開としてKCC2機能を活性化する因子に焦点を絞り、KCC2の細胞内領域と結合する蛋白をyeast two-hybrid法により全脳ライブラリーから検索した。その結果、脳型クレアチンキナーゼが同定され、免疫沈降法でもKCC2との結合を確認できた。そこで、Cl^-チャネルとKCC2を株化細胞に共発現させ、グラミシジンパッチクランプで[Cl^-]_iを測定することによりKCC2機能を評価する系を確立した。

研究成果

(9件)

すべてその他

すべて文献書誌 (9件)

[文献書誌] Ferkas, I.et al.: "Complement C5a receptor-mediated signalling may be involved in neurodegeneration in Alzheimer's disease."J.Immunol.. 170. 5764-5771 (2003)
[文献書誌] Okabe, A.et al.: "Changes in chloride homeostasis-regulating gene expressions in the rat hippocampus following amygdala kindling."Brain Res.. 990. 221-226 (2003)
[文献書誌] Isomura, Y.et al.: "Synaptically activated Cl^- accumulation responsible for depolarizing GABAergic responses in mature hippocampal neurons."J.Neurophysiol.. 90. 2752-2756 (2003)
[文献書誌] Ikeda, M.et al.: "Differential development of cation-chloride cotransporters and Cl^- homeostasis contributes to differential GABAergic actions between developing rat visual cortex and dorsal lateral geniculate nucleus."Brain Res. 984. 149-159 (2003)
[文献書誌] Takeuchi, K.et al.: "Effect of urinary trypsin inhibitor on potassium currents : fetus modulates membrane excitability by production of UTI."Acta Obstet.Gynecol.Scand.. 83. 6-11 (2004)
[文献書誌] Okabe, A.et al.: "Homogenous glycine receptor expression in cortical plate neurons and Cajal-Retzius cells of neonatal rat cerebral cortex."Neuroscience. 123. 715-724 (2004)
[文献書誌] Nakanishi, K.et al.: "Altered synaptic activities in cultures of neocortical neurons from prenatally X-irradiated rats."Neurosci.Lett.. 355. 61-64 (2004)
[文献書誌] Shibata, S.et al.: "Experience-dependent changes in intracellular Cl^- regulation in developing auditory neurons."Neurosci.Res.. 48. 211-220 (2004)
[文献書誌] Inoue, K.et al.: "Interaction of neuron-specific K^+-Cl^- cotransporter, KCC2, with brain-type creatine kinase."FEBS Lett.. (in press).

2003 年度 実績報告書

てんかん原性大脳皮質形成異常モデル動物の確立とアンチセンス治療法への展開

研究代表者

福田 敦夫 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50254272)

研究成果

[文献書誌] Ferkas, I.et al.: "Complement C5a receptor-mediated signalling may be involved in neurodegeneration in Alzheimer's disease."J.Immunol.. 170. 5764-5771 (2003)

[文献書誌] Okabe, A.et al.: "Changes in chloride homeostasis-regulating gene expressions in the rat hippocampus following amygdala kindling."Brain Res.. 990. 221-226 (2003)

[文献書誌] Isomura, Y.et al.: "Synaptically activated Cl^- accumulation responsible for depolarizing GABAergic responses in mature hippocampal neurons."J.Neurophysiol.. 90. 2752-2756 (2003)

[文献書誌] Ikeda, M.et al.: "Differential development of cation-chloride cotransporters and Cl^- homeostasis contributes to differential GABAergic actions between developing rat visual cortex and dorsal lateral geniculate nucleus."Brain Res. 984. 149-159 (2003)

[文献書誌] Takeuchi, K.et al.: "Effect of urinary trypsin inhibitor on potassium currents : fetus modulates membrane excitability by production of UTI."Acta Obstet.Gynecol.Scand.. 83. 6-11 (2004)

[文献書誌] Okabe, A.et al.: "Homogenous glycine receptor expression in cortical plate neurons and Cajal-Retzius cells of neonatal rat cerebral cortex."Neuroscience. 123. 715-724 (2004)

[文献書誌] Nakanishi, K.et al.: "Altered synaptic activities in cultures of neocortical neurons from prenatally X-irradiated rats."Neurosci.Lett.. 355. 61-64 (2004)

[文献書誌] Shibata, S.et al.: "Experience-dependent changes in intracellular Cl^- regulation in developing auditory neurons."Neurosci.Res.. 48. 211-220 (2004)

[文献書誌] Inoue, K.et al.: "Interaction of neuron-specific K^+-Cl^- cotransporter, KCC2, with brain-type creatine kinase."FEBS Lett.. (in press).

2003 年度実績報告書

福田敦夫浜松医科大学, 医学部, 教授 (50254272)