造血器腫瘍に対する新たな免疫遺伝子療法の開発

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12557081
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 安川 正貴 愛媛大学, 医学部, 助教授 (60127917)
• 研究分担者: 薬師神 芳洋 愛媛大学, 医学部, 助手 (30294797) ; 酒井 郁也 愛媛大学, 医学部, 助手 (10205700)
• キーワード: 造血器腫瘍 / 白血病 / 細胞免疫療法 / WT1 / テロメラーゼ / 細胞障害性T細胞 / 自殺遺伝子 / 不死化細胞

研究概要

本研究では、細胞傷害性T細胞(CTL)に認識される新たなヒト白血病特異抗原の同定と白血病特異的CTLをHerpesvirus saimiri(HVS)感染によって不死化させ、自殺遺伝子導入によって安全性を獲得した免疫遺伝子療法の開発の目的で研究を行ない、下記の結果を得た。
1.WT1およびhTERTのアミノ酸配列よりHLA-A*2402のアンカーモチーフを有する9 merペプチドを合成し、これらのペプチドをパルスした樹状細胞(DC)で自己CD8陽性T細胞を繰り返し刺激した。その結果、WT1ペプチドのうちWT1-T2 (CMTWNQMNL)およびWT1-T4 (RWPSCQKKF)、hTERTペプチドのうちTEL324 (VYAETKHFL)およびTEL461 (VYGFVRACL)に特異的なCTLクローンを樹立した。
2.これらのCTLクローンの白血病細胞株および新鮮分離白血病細胞に対する細胞傷害性を検討したところ、HLA-A24陽性細胞株に対してのみ細胞傷害性を示し、この細胞傷害性は抗HLAクラスI抗体で阻止された。
3.WT1高発現細胞株をWT1遺伝子アンチセンスオリゴヌクレオチドによって処理し、WT1蛋白発現を選択的に抑制したところ、WT1ペプチド特異的CTLの細胞傷害性の低下を認めた。
4.これらCTLの正常骨髄細胞増殖への影響をコロニー形成試験で検討したところ、HLA-A24の有無に関わらず全く影響を示さなかった。
5.WT1およびhTERT特異的CTLをHVSによって不死化させ、長期間培養を継続したが、ペプチド特異的細胞傷害性は保たれており、白血病細胞に対する細胞傷害性も保持された。さらに、HSV-1 tk遺伝子を組み込んだレトロウイルスベクターによって遺伝子導入した。tk遺伝子導入細胞は、ガンシクロビル添加によって死滅することが確認された。

研究成果

• [文献書誌] Azuma, T., et al.: "Identification of a novel WT1-derived peptide which induces HLA-A24-restricted anti-leukaemia cytotoxic T lymphocytes"British Journal of Haematology. 116. 601-603 (2002)
• [文献書誌] Yasukawa, M.: "Immunotherapy for leukemia targeting the Wilms' tumor gene"Leukemia and Lymphoma. 42. 267-273 (2001)
• [文献書誌] Yasukawa, M., et al.: "HLA class II-restricted antigen presentation of endogenous bcr-abl fusion protein by CML-derived dendritic cells to CD4^+ T lymphocytes"Blood. 98. 1498-1505 (2001)
• [文献書誌] Yasukawa, M., et al.: "Low frequency of BCL-2/J_H translocation in peripheral blood lymphocytes of Japanese individuals"Blood. 98. 486-488 (2001)
• [文献書誌] Arai, J., et al.: "Identification of human telomerase reverse transcriptase-derived peptides which induce HLA-A24-restricted antileukemia CTLs"Blood. 97. 2903-2907 (2001)
• [文献書誌] Hasegawa, A., et al.: "Transcriptional down-regulation of CXCR4 induced by impaired association of YY1 with c-Myc in HHV-6-infected cells"Journal of Immunology. 166. 1125-1131 (2001)