新規熱ショック蛋白質誘導剤の肝移植への応用

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12557105
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 六反 一仁 徳島大学, 医学部, 助教授 (10230898)
• 研究分担者: 杉田 尚久 田辺製薬(株), 創薬研究所, 主任研究員 ; 田代 征記 徳島大学, 医学部, 教授 (30040249)
• キーワード: 熱ショック蛋白質70 / シャペロン誘導剤 / geranylgeranylacetone / geranylgeraniol / テルペン化合物 / 肝移植 / 阻血・再灌流傷害 / 肝細胞傷害

研究概要

本研究は、安全にかつ選択的に熱ショック蛋白質を誘導するgeranylgeranylacetone(GGA)の周辺化合物からさらに有効な化合物を選定し、ラット肝移植モデルでの有効性の評価と安全性を行確認し、熱ショック蛋白質誘導剤の肝移植への応用を目的とした。本年度(平成12年度)に各研究者は研究計画に沿って以下の研究成果をあげた。
六反(研究代表者):HSF1遺伝子のプロモーターを導入したHela細胞のルシフェラーゼアッセイによるスクリーニングを行い、有効な化合物として14種類の非環状テルペン化合物を選び出した。この14種類の化合物のHSP70誘導能についてはウエスタンブロット法により確認し、geranylgeraniol(GGO)を最も有効な化合物として選び出した。杉田(研究分担者):新規化合物(GGO)の体内動態を解析するため、あらたにHPLC法による血中濃度の測定方法を開発した。この方法を用いて、ラットに200mgのGGOを経口投与すると、in vitroで有効な濃度(数μM)が数時間維持される事を確認した。また、静脈内投与を行うと、30分以内に血中から消失することも確認した。GGOの急性毒性を検討し、10日間にわたる2g/kg/日の経口投与並びに1gの静注では全く急性毒性が認められないことを確認した。
田代(研究分担者):まず、ラットの肝阻血・再灌流モデルを用いて、GGOの有効性を評価した。GGAでは、経口投与、静脈投与とも30分の阻血・再灌流モデルでは有効性を認めなかったが、GGOは1mg/kgの一回静脈投与で、明らかな有効性を示した。これらの結果をもとに、現在、ラットの同種肝移植モデルを用いて、GGOの有効性を検討している。

研究成果

• [文献書誌] Kawai,T.,Teshima,S.,Kusumoto,K.,Kawahara,T.,Rokutan,K., et al.: "A non-toxic heat shock protein 70 inducer, geranylgeranylacetone, restores the heat shock response in gastric mucosa of protein-malnourished rats."Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 136. 138-148 (2000)
• [文献書誌] Rokutan,K.,Miyoshi,M.,Teshima,S.,Kawahara,T.,and Kishi,K.: "Phenylarsine oxide inhibits heat shock protein 70 induction in cultured guinea pig gastric mucosal cells."American Journal of Physiology. 279. C1506-C1515 (2000)
• [文献書誌] Rokutan K,Teshima S,Kawai T,Kawahara T,Kusumoto K, et al.: "Geranylgeranylacetone stimulates mucin synthesis in cultured guinea pig gastric pit cells through inducing a neuronal nitric oxide synthase."Journal of Gastroenterology. 35. 673-681 (2000)
• [文献書誌] Teshima S,Kutusmi H,Kawahara T,Kishi K,Rokutan K.: "Regulation of growth and apoptosis of cultured guinea pig gastric mucosal cells by mitogenic oxidase 1."American Journal of Physiology. 279. G1169-G1176 (2000)
• [文献書誌] Tomisato W,Takahashi N,Komoto C,Rokutan K,Tsuchiya T,Mizushima T.: "Geranylgeranylacetone protects cultured guinea pig gastric mucosal cells from indomethacin."Digestive Diseases and Sciences. 45. 1674-1679 (2000)
• [文献書誌] Tsutsumi,S.,Rokutan,K.,Tsuchiya,T.,and Mizushima,T.: "Spontaneous apoptotic DNA fragmentation in cultured guinea pig gastric mucosal cells."Digestive Diseases and Sciences. 45. 171-179 (2000)