2001 年度実績報告書

多機能成長因子CTGF/エコジェニンのドメイン別測定法の開発と臨床検査法への応用

研究課題

研究課題/領域番号	12557154
研究機関	岡山大学
研究代表者	滝川正春岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (20112063)
研究分担者	西田崇岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (30322233) 久保田聡岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (90221936) 中西徹岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (30243463) 椋代義樹岡山大学, 歯学部, 教務員 (50325099)
キーワード	CTGF / 軟骨細胞 / 骨芽細胞 / CCNファミリー / ELISA / 細胞分化 / 血管新生(病)
研究概要	1)昨年度に構築したCTGF/エコジェニンのIGF結合タンパク質様ドメイン(IGFBP)、フォンビルブランドファクター・タイプCリピートドメイン(VWC)、トロンボスポンジンタイプ1リピートドメイン(TSP1)、C末ドメイン(CT)の各ドメイン毎の発現ベクターを用い、Brevibacillus choshinensisで各組み換え体タンパク質の大量生産に成功した。現在、これらを用い各モジュールがエコジェニン/CTGFの多面的作用に如何に関与しているか、その生物活性の検定をおこなっている。 2)CTGF/エコジェニンの一部のドメインを欠損させたタンパク質を真核細胞内で発現させる10種以上のプラスミドを作製し、それらを応用してIGFBP、TSPドメインをそれぞれ欠いたCTGFを産生するHeLa細胞株を樹立した。 3)上記のドメイン単独タンパク質を用いて、CTGFに対して調製した6種のモノクローナル抗体、及び2種の抗血清に対しエピトープがどのドメインにあるかを特定した。その結果、IGFBPを認識するもの1種、VWCを認識するもの3種、TSPを認識するもの1種、CTを認識するもの1種のドメイン特異的抗体を得る事ができた。さらにそれらを組み合わせて応用し、以下の3種類の酵素抗体法(ELISA)定量システムを樹立した。 (1)VWCとCTに対する抗体によるsandwich法であり、全長CTGFを高感度で定量できる。 (2)GFBPとVWCを標的としたシステムで、N末前半断片を特異的に認識する。 (3)1つは異なった抗VWC抗体によりVWCドメインだけを認識するシステムで、これは全長CTGFを認識せずにVWCを含む断片にのみ反応性を発揮するので、CTGF断片の追跡、機能解析に特に有用である。これらのELISAシステムはそれぞれの特徴が故に臨床検査法として極めて有用と考えられる。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Takashi Yamashiro et al.: "Mechanical stimulation induces CTGF exression in rat osteocytes"Journal of Dental Research. 80. 461-465 (2001)
[文献書誌] Takanori Eguchi et al.: "Regulatory mechanism of human connective tissue growth factor (CTGF/Hcs24) gene expression in a human chondrocytic cell line, HCS-2/8"Journal of Biochemistry. 130. 79-87 (2001)
[文献書誌] Satoshi Kubota et al.: "Novel mode of processing and secretion of connective tissue growth factor/ecogenin (CTGF/Hcs24) in chondrocytic HCS-2/8 cells"Bone. 29. 155-161 (2001)
[文献書誌] Tsuyoshi Shimo et al.: "Connective tissue growth factor as a major angiogenic agent that is induced by hypoxia in a human breast cancer cell line"Cancer Letters. 174. 57-64 (2002)
[文献書誌] Gne Yoshimichi et al.: "CTGF/Hcs24 induces chondrocyte differentiation through p44/42 MAPK/extracelular-signal regulated kinase (ERK)"European Jounal of Biochemistry. 268. 1-9 (2001)
[文献書誌] Tsuyoshi Shimo et al.: "Involvement of CTGF, a hypertrophic chondrocyte-specific gene product, in tumor angiogenesis"Oncology. 61. 315-322 (2001)
[文献書誌] 中西徹, 滝川正春: "新・分子骨代謝学と骨粗鬆症"軟骨細胞の分化制御と軟骨形成. 55-68 (2001)

2001 年度 実績報告書

多機能成長因子CTGF/エコジェニンのドメイン別測定法の開発と臨床検査法への応用

研究代表者

滝川 正春 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (20112063)

研究成果

[文献書誌] Takashi Yamashiro et al.: "Mechanical stimulation induces CTGF exression in rat osteocytes"Journal of Dental Research. 80. 461-465 (2001)

[文献書誌] Takanori Eguchi et al.: "Regulatory mechanism of human connective tissue growth factor (CTGF/Hcs24) gene expression in a human chondrocytic cell line, HCS-2/8"Journal of Biochemistry. 130. 79-87 (2001)

[文献書誌] Satoshi Kubota et al.: "Novel mode of processing and secretion of connective tissue growth factor/ecogenin (CTGF/Hcs24) in chondrocytic HCS-2/8 cells"Bone. 29. 155-161 (2001)

[文献書誌] Tsuyoshi Shimo et al.: "Connective tissue growth factor as a major angiogenic agent that is induced by hypoxia in a human breast cancer cell line"Cancer Letters. 174. 57-64 (2002)

[文献書誌] Gne Yoshimichi et al.: "CTGF/Hcs24 induces chondrocyte differentiation through p44/42 MAPK/extracelular-signal regulated kinase (ERK)"European Jounal of Biochemistry. 268. 1-9 (2001)

[文献書誌] Tsuyoshi Shimo et al.: "Involvement of CTGF, a hypertrophic chondrocyte-specific gene product, in tumor angiogenesis"Oncology. 61. 315-322 (2001)

[文献書誌] 中西 徹, 滝川 正春: "新・分子骨代謝学と骨粗鬆症"軟骨細胞の分化制御と軟骨形成. 55-68 (2001)

2001 年度実績報告書

滝川正春岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (20112063)

[文献書誌] 中西徹, 滝川正春: "新・分子骨代謝学と骨粗鬆症"軟骨細胞の分化制御と軟骨形成. 55-68 (2001)