2001 年度実績報告書

細胞分裂関連因子を発現させるアンチセンスベクターの開発と歯周病治療薬への応用

研究課題

研究課題/領域番号	12557189
研究機関	九州歯科大学
研究代表者	安細敏弘九州歯科大学, 歯学部, 助教授 (80244789)
研究分担者	山岸純一大日本製薬, 主任研究員粟野秀慈九州歯科大学, 歯学部, 講師 (20301442) 竹原直道九州歯科大学, 歯学部, 教授 (00038879)
キーワード	ペプチドグリカン / 歯周病 / P. gingivalis / cell divition
研究概要	ペブチドグリカンは細菌の細胞壁の基礎構造をなす独特な化学紀成と分子構造をもったヘテロポリマーであり、細菌の生命の維持に深く関わっていることが知られている。我々はPorphyromonas gingivalis (以下P. g)のペプチドグリカン合成過程に重要な酵素の一つであるmurC遺伝子の構造と礎能を明らかにした。この領域は大腸菌におけるmra領域(murein synthesis cluster a)に相当することが明らかになった。現在までにP. gのmurC遺伝子の下流に存在する遺伝子のクローニングを行い、3つのORFがそれぞれ大腸菌のFtsQ、FtsAおよびFtsZに対して高いホモロジー(16%,33%,54%)を示すことがわかった。P. gFtsZは、他菌種FtsZと同様にGTPase活性を有するが、以下の点でユニークな性質を示すことがわかった。すなわち、1)GTPase活性がNa^+やK^+によって活性が阻害されること、2)Mg^<2+>非存在下でも活性を有すること、およびEDTAによって活性が阻害されないことが明らかとなった。また、P. gFtsZのC末端deletion mutantを作製して、大腸菌におけるfilamentationの変化を観察したところ、C末端から177アミノ酸をdeletionしたmutantでは、filamentationがみられなくなることからT281からR329の49アミノ酸残基内にP. gFtsZの機能に重要な領域が存在することが示唆された。そこで細菌由来のFtsZについてアラインメント分析を行ったところ,A320を中心とした10残基からなる保存領域が存在することを見いだし,Adomainと名付けた。site-directed mutagenesis法により作製されたAla320をターゲットにした2つの点変異株(A320HおよびA320R)では,P. gFtsZタンパクの発現によってFilamentationが観察されず,コントロールと同様の形態を示した。これらの結果からP. gFtsZのAla320が細胞分裂に重要な役割を有していることが示唆された。

研究成果
(12件)

すべてその他

すべて文献書誌 (12件)

[文献書誌] Ansai, T. et al.: "A murC gene in Porphyromonas gingivalis 381"Microbiol.. 141. 2047-2052 (1995)
[文献書誌] Ansai, T. et al.: "Interactious between a minimal protein serine/threonine phosphatase and phosphopeptide substrate sequence"J. Biol. Chem.. 271. 24401-24407 (1996)
[文献書誌] Ansai, T. et al.: "Purification and characterization of alkaline phosphatase containing phosphotyrosyl phosphatase activity from the bacterium Prevotella intermedia"FEBS Lett.. 428. 157-160 (1998)
[文献書誌] Chen, X., Ansai, T.et al.: "Isolation, cloning, and expression of an acid phosphatase containing phosphotyrosyl phosphatase activity from Prevotella intermedia"J. Bacteriol.. 181. 7107-7114 (1999)
[文献書誌] Awano, S., Ansai, T.et al.: "sequencing, expression and biochemical characterization of the Porphyromonas gingivalis pepO gene encoding a protein ‥‥"FEBS Lett.. 460. 139-144 (1999)
[文献書誌] Ansai, T. et al.: "Phosphatases containing phosphotyrosyl phosphatase activity from Prevotella intermedia : structure, function, and evolution"Recent Res. Devel. Microbiol.. 4. 569-584 (2000)
[文献書誌] Arimoto, T., Ansai, T et al.: "Kinetic analysis of PPi-dependent phodphofructokinase from Porthyromonas gingivalis"FEMS Microbiol. Lett.. (in press).
[文献書誌] Arimoto, T., Ansai, T.et al.: "Cloning, expression, and characterization of pyrophosphate-dependent phosphofructokinase gene from Porphyromonas gingivalis"J. Dent. Health. 51. 281-292 (2001)
[文献書誌] Akifusa, S., Ansai, T.et al.: "Characterization of the Porphyromonas gingivalis FtsZ containing a novel GTPase activity"Curr. Microbiol.. (in press).
[文献書誌] Yu, W., Ansai, T.et al.: "A conserved Ala 320 in the FtsZ of Porphyromonas gingivalis is important for cell divition"Curr. Microbiol.. (in press).
[文献書誌] Yamagishi, J-I. et al.: "Alterations in the DNA topoisomerase IV grlA gene responsible for quinolone resistance Staphylococcus aureus"Antimicrob. Agents chemother. 40. 1157-1163 (1996)
[文献書誌] 安細敏弘(分担執筆): "歯周病最前線-オーラルケアが守る長寿社会のQOL-"日本歯科評論. 354 (2000)

2001 年度 実績報告書

細胞分裂関連因子を発現させるアンチセンスベクターの開発と歯周病治療薬への応用

研究代表者

安細 敏弘 九州歯科大学, 歯学部, 助教授 (80244789)

研究成果

[文献書誌] Ansai, T. et al.: "A murC gene in Porphyromonas gingivalis 381"Microbiol.. 141. 2047-2052 (1995)

[文献書誌] Ansai, T. et al.: "Interactious between a minimal protein serine/threonine phosphatase and phosphopeptide substrate sequence"J. Biol. Chem.. 271. 24401-24407 (1996)

[文献書誌] Ansai, T. et al.: "Purification and characterization of alkaline phosphatase containing phosphotyrosyl phosphatase activity from the bacterium Prevotella intermedia"FEBS Lett.. 428. 157-160 (1998)

[文献書誌] Chen, X., Ansai, T.et al.: "Isolation, cloning, and expression of an acid phosphatase containing phosphotyrosyl phosphatase activity from Prevotella intermedia"J. Bacteriol.. 181. 7107-7114 (1999)

[文献書誌] Awano, S., Ansai, T.et al.: "sequencing, expression and biochemical characterization of the Porphyromonas gingivalis pepO gene encoding a protein ‥‥"FEBS Lett.. 460. 139-144 (1999)

[文献書誌] Ansai, T. et al.: "Phosphatases containing phosphotyrosyl phosphatase activity from Prevotella intermedia : structure, function, and evolution"Recent Res. Devel. Microbiol.. 4. 569-584 (2000)

[文献書誌] Arimoto, T., Ansai, T et al.: "Kinetic analysis of PPi-dependent phodphofructokinase from Porthyromonas gingivalis"FEMS Microbiol. Lett.. (in press).

[文献書誌] Arimoto, T., Ansai, T.et al.: "Cloning, expression, and characterization of pyrophosphate-dependent phosphofructokinase gene from Porphyromonas gingivalis"J. Dent. Health. 51. 281-292 (2001)

[文献書誌] Akifusa, S., Ansai, T.et al.: "Characterization of the Porphyromonas gingivalis FtsZ containing a novel GTPase activity"Curr. Microbiol.. (in press).

[文献書誌] Yu, W., Ansai, T.et al.: "A conserved Ala 320 in the FtsZ of Porphyromonas gingivalis is important for cell divition"Curr. Microbiol.. (in press).

[文献書誌] Yamagishi, J-I. et al.: "Alterations in the DNA topoisomerase IV grlA gene responsible for quinolone resistance Staphylococcus aureus"Antimicrob. Agents chemother. 40. 1157-1163 (1996)

[文献書誌] 安細 敏弘(分担執筆): "歯周病最前線-オーラルケアが守る長寿社会のQOL-"日本歯科評論. 354 (2000)

2001 年度実績報告書

安細敏弘九州歯科大学, 歯学部, 助教授 (80244789)

[文献書誌] 安細敏弘(分担執筆): "歯周病最前線-オーラルケアが守る長寿社会のQOL-"日本歯科評論. 354 (2000)