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主要な牛乳アレルゲンであるβ-ラクトグロブリン(β-Lg)に特異的なマウスCD4陽性T細胞クローンG1.19は、MHCクラスII分子である1-A^b分子とβ-Lgの119-133残基に相当するペプチド(P119-133)との複合体を特異的に認識する。P119-133はC57BL/6マウスにおいて、β-Lg由来の抗原ペブチドのうち最も効率よく抗原提示され、最も強いT細胞応答を誘導するペブチドである。
G1.19由来可溶化型TCR(sTCR)をバキュロウイルス発現系を用いて分泌発現させ、抗TCRβ鎖抗体を用いてアフィニティー精製した。sTCRα鎖はその定常領域下流にロイシンジッパー構造を形成する塩基性ペプチド、c-mycのエピトープ配列をつけたものであり、sTCRβ鎖はその定常領域下流にロイシンジッパー構造を形成する酸性ペブチド、ビオチン化酵素(BirA)の認識配列をつけたものである。
精製したsTCRにビオチンの存在下BirAを作用させることにより、ビオチン化されることを確認した。さらに、ビオチン化sTCRをストレプトアビジンと反応させると、多量体化sTCRが調製できることを確認した。
1-A^b遺伝子を導入したP12細胞を抗原提示細胞として用い、P119-133存在下でのG1.19の増殖応答に対するsTCR添加の影響を検討した。その結果、sTCR添加によりG1.19の増殖応答は顕著に抑制されることが明らかとなった。これはG1.19細胞上のTCRとそのリガンドである1-A^b/P119-133複合体との結合を、sTCRが競合的に阻害したためと考えられることから、本研究で調製したsTCRは1-A^b/P119-133に対する結合能を持つことが明らかとなった。
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