| 研究概要 |
本研究では、組換えDNA技術を用いて、魚類のSOD遺伝子並びにその5'-フランキング領域をクローニングしてその一次構造を決定し、分子レベルでの魚類SODの構造・機能並びにプロモーター領域を明らかにすること、更には、DNAプローブや本酵素を認識する特異抗体を利用することにより、魚類の酸化ストレス応答を明らかにすることを目的とする。本年度は、ヒラメの数種の人為細菌感染系を用い、魚病の病態発現におけるSOD活性の挙動を調べた。数種の魚病細菌の中ではヒラメの代表的細菌感染症であるエドワジエラ症の原因菌のEdwardsiella tarda感染群(強毒株、弱毒株共に)で感染初期に肝膵臓のCu,Zn-SOD活性の急激な変化が確認された。しかしながら、Mn-SODに関しては、Cu,Zn-SODと比較して活性が約1/10程度であったことから、正確に挙動を調べることができなかった。従って、両SODの応答を遺伝子、タンパクレベルで調べるために、ヒラメの肝膵臓よりCu,Zn-SOD及びMn-SODを単離精製し、その酵素学的諸性質を明らかにした。次いで精製酵素を用いて、両酵素のN末端のアミノ酸配列を決定した。その情報に基づいてデザインしたプライマーを用い現在RT-PCR、5'-RACE及び3'-RACEによりSOD遺伝子のクローニングを行い、ほぼ全長に相当する両SOD遺伝子のcDNAが得られたところである。次年度は、cDNAの塩基配列より両SODの全一次構造を決定すること、そして5'-フランキング領域のクローニング及び高発現系の構築を予定している。
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