| 研究課題/領域番号 |
12670039
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
松下 正之 岡山大学, 医学部, 助手 (30273965)
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| 研究分担者 |
松井 秀樹 岡山大学, 医学部, 教授 (30157234)
森脇 晃義 岡山大学, 医学部, 講師 (10144742)
富澤 一仁 岡山大学, 医学部, 講師 (40274287)
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| キーワード | ChaK / Trp channel / 舌 / カルシウム / キナーゼ / Zinc finger / 結晶解析 / ATP |
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| 研究概要 |
目的
新しく発見したTRP型Ca2_+チャネルは、キナーゼ活性を持つチャネル(Channel Kinase:ChaK)と言う、全く新しい概念を提唱する分子である。本研究では、ChaKが生理的にどのような機能を持つか、またキナーゼ活性がチャネルの制御にどのように関与しているかを解明するために以下の実験を行い、成果を得る事ができた。
1、ChaKの組織分布および発現細胞の同定
ChaKの組織分についてはイムノブロットにより、舌に発現が多い事が判明した。舌における発現細胞の同定を行うために、Gustducinとの2重染色を行い、taste budsに発現している事が確認された。
2、ChaKのチャネル活性の測定
ChaKのCell lineをHEK293細胞で確立し、calcium imagingを行った。TRP channelはtharpsigarginやIP3,cyclic nucleotideによって活性化されるため、これらの薬物をアゴニストとしFura-2を用いて測定し、Store Operating Calcium活性がChaKにある事を見い出した。また、チャネルの活性にはkinase domainが必要である事も見い出した。
構造制御機構
ChaKの構造制御機構を調べるために、ChaKのkinase domainの結晶解析を行った。結晶解析の結果より、この分子が2量体を形成し、Zn2_+を持つ新しい形のKinaseである事が確認された。
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