| 研究課題/領域番号 |
12670063
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| 研究機関 | 静岡県立大学 |
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研究代表者 |
合田 敏尚 静岡県立大学, 食品栄養科学部, 助教授 (70195923)
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| 研究分担者 |
駿河 和仁 静岡県立大学, 食品栄養科学部, 助手 (70315852)
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| キーワード | ラクターゼ / 小腸 / 遺伝子発現 / 転写補足因子 / 核内因子 / Cdx-2 / 甲状腺ホルモン / 発達 |
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| 研究概要 |
1.小腸における遺伝子発現と関連する転写補足因子(Coactivator)のクローニング:主要な転写補足因子として、ラットのCBP、p300、AFA70、TIF2、SRC-1のcDNAをクローニングした。この中では、CBPとp300が小腸で高い発現性を示し、特にp300は小腸に強く発現するというように小腸特異的な発現性を示した。CBPおよびp300の核内レセプター結合領域とGAL4活性化ドメインの融合タンパク質発現ベクターを構築し、これを核内因子とともにヒト小腸様細胞株Caco-2にtransfectするtwo-hybrid assayの系を確立した。
2.発達に伴う糖質消化吸収関連遺伝子の発現変動と関連する転写調節因子の検討:離乳前から離乳完了期のラット小腸におけるラクターゼ(LPH)の発現に及ぼす甲状腺ホルモン(T_3)の影響を検討した。小腸のLPH mRNA量は離乳開始直前に最大を示した後、離乳完了期まで徐々減少したが、この減少に伴い、小腸のCdx-2mRNA量は減少し、LPH遺伝子5'上流の転写制御エレメントへのCdx-2の結合量も減少した。離乳期のラットにT_3を投与したところ、Cdx-2mRNA量が低下し、LPH mRNA量も減少した。従って、小腸の発達に伴うLPH遺伝子発現量の減少は、甲状腺ホルモンによる転写調節因子Cdx-2の発現量の低下およびその転写制御エレメントへの結合活性の減少によって起こるものと考えられた。
3.Cdx-2のリン酸化・脱リン酸化調節による転写活性変動機構の検討:大腸菌で発現させたCdx-2をcAMP依存性プロテインキナーゼでリン酸化したところ、LPH遺伝子転写制御領域への結合活性が低下した。Caco-2細胞におけるLPH mRNAの発現量はT_3とアデニル酸シクラーゼの活性化剤forskolinの同時投与により著しく低下した。従って、LPH遺伝子の発現はリン酸化シグナルによるCdx-2のDNA結合活性の変化により制御されていることが示唆された。
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