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2001 年度 研究成果報告書概要

PDZ蛋白と結合する新しいCl^-チャネルの機能的再構成とその制御機構の解析

研究課題

研究課題/領域番号 12670083
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 薬理学一般
研究機関千葉大学

研究代表者

小倉 武彦  千葉大学, 大学院・医学研究院, 助手 (00292673)

研究分担者 中谷 晴昭  千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (60113594)
研究期間 (年度) 2000 – 2001
キーワードCLC-3 / EBP50 / PDZドメイン / CFTR / ORCC
研究概要

1.ClC-3(ClC-3A)の新しいスプライシングバリアント、ClC-3Bをヒト膵臓cDNAライブラリーより単離した。2.RT-PCRにより、ClC-3BのmRNAは上皮組織をはじめとして広く種々の組織に発現していることが判った。また、ClC-3Bに対する特異的な抗体を用いた免疫組織染色により、ClC-3B蛋白は気管や気管支の繊毛上皮や膀胱の移行上皮など、上皮細胞に多く発現していることが明らかとなった。3.Pull-downアッセイにおいて、ClC-3BのC末端領域はEBP50の2番目のPDZドメインと特異的に結合した。また、免疫沈降実験においても、ClC-3BとEBP50は共沈した。4.ClC-3Bを単独でC127細胞に発現させた場合には、ClC-3Bは細胞内領域に分布し、細胞膜表面にはほとんど発現しなかった。ClC-3BをEBP50とともに共発現させると、ClC-3Bがruffling membraneの辺縁でのみ膜表面に発現するのが認められた。5.パッチクランプ法を用いた電気生理学的実験では、ClC-3BとEBP50をC127細胞に共発現させると、ruffling membraneの辺縁においてのみ、上皮で報告されている外向き整流性Cl-チャネル(ORCC)と一致した特徴をもつCl-チャネル活性が記録された。さらにこのCl-チャネルは、ORCCと同様にCFTR依存的にプロテインキナーゼAによる活性化を受けた。また、この活性化はEBP50が存在しないと認められなかった。
以上の実験結果から、今回新たにクローニングしたClC-3BがORCCのチャネル蛋白である可能性が高いこと、PDZドメインを介したEBP50との結合がClC-3Bの機能の発現や制御に重要な役割を果たしていることが示唆された。

  • 研究成果

    (23件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (23件)

  • [文献書誌] Ogura, T.: "ClC-3B, a novel ClC-3 splicing variant that interacts with EBP5O and facilitates expression of CFTR-regulated ORCC"FASEB J.. (in press). (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Furukawa, T.: "Phosphorylation and functional regulation of ClC-2 chloride channels expressed in Xenopus oocytes by M cyclin-dependent protein kinase"J Physiol.. (in press). (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Ishihara, M.: "Cystine transport activity of heterozygous rBAT mutants expressed in Xenopus oocytes"NEPHRON. (in press). (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Kobayashi, S.: "Inhibitory effect of bepridil on hKvl.5 channel current: comparison with amiodarone and E-4031"Eur J. Pharmacol.. 430. 149-157 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Suzuki, M.: "Functional roles of cardiac and vascular ATP-sensitive potassium channels clarified by Kir6.2-knockout mice"Circ. Res.. 88. 570-577 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 中谷晴昭: "抗不整脈薬の薬理学-分子レベルの作用-"分子心血管病. 3. 41-47 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 中谷晴昭: "イオンチャネル生理学からみた不整脈の成因"綜合臨床 特集ホルター心電図を読む. 50. 664-670 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 中谷晴昭: "アミオダロンのマルチチャネル遮断作用とその電気薬理学的意義"Progress in Medicine. 21. 257-262 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 中谷晴昭: "21世紀の抗不整脈薬-新規K^+チャネル遮断薬の現状と展望-"不整脈治療の最前線-薬物治療と非薬物治療-最新医学. 55. 58-64 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 中谷晴昭: "抗不整脈薬のK^+チャネル遮断作用とその電気生理学的意義"心電図. 20. 195-201 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 中谷晴昭: "薬物動態・作用と遺伝子多型 薬物治療の患者個別化を目指した21世紀の新展開"LQTとイオンチャネル. 457 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Ogura, T.: "C1O3B, a novel C1C-3B splicing variant that interacts with EBP50 and facilitates expression of CFTR-regulated ORCC"FASEB J.. (in press). (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Furukawa, T.: "Phosphorylation and functional regulation of C1C-2 chloride channels expressed in Xenopus oocytes by M cyclin-dependent protein kinase"J. Physiol.. (in press). (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Ishihara, M.: "Cystine transport activity of heterozygous rBAT mutants expressed in Xenopus oocytes"NEPHRON. (in press). (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Suzuki, M.: "Role of sarcolemmal K_<ATP> channels in cardioprotection against ischemia/reperfusion injury in mice"J. Clin. Invest.. 109. 509-516 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Ishida, H.: "Opening of mitochondrial K_<ATP> channels attenuates the ouabain-induced calcium overload in mitochondria"Circ. Res.. 89. 856-858 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kobayashi, S.: "Inhibitory effect of bepridil on hKv1.5 channel current : comparison with amiodarone and E-4031"Eur. J. Pharmacol. 430. 149-157 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Suzuki, M.: "Functional roles of cardiac and vascular ATP-sensitive potassium channels clarified by Kir6.2-knockout mice"Circ. Res.. 88. 570-577 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Tanito, Y.: "Interaction of edrophonium with muscarinic acetylcholine M_2 and M_3 receptors"Anesthesiology. 94, 5. 804-814 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Suzuki, T.: "Beneficial effects of nitric oxide synthase inhibition on the recovery of neurological function after spinal cord injury in rats."Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharniacol.. 363. 94-100 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Hirota, M.: "Influence of extracellular K^+ concentrations on quinidine-induced K^+ current inhibition in rat ventricular myocytes"J. Pharm. Pharmacol.. 52. 99-105 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Sakurada, K.: "cis-9, 10-Metylenehexadecanoic acid inhibits contractility and actomyosm ATPase activity of guinea pig myocardium"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 274. 533-536 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Nakaya, H.: "Inhibitory effects of JTV-519, a novel cardioprotective drug, on potassium currents and experimental atrial fibrillation in guinea-pig hearts"Br. J. Pharmacol.. 131. 1363-1372 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 2003-09-17  

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