Necdinは、神経系に発現する約43kDa蛋白質で、細胞増殖抑制作用を有する。また転写因子E2F1やp53と結合しそれらの転写活性を抑制する。本研究では酵母Two-Htbrid法を用いて、ニューロンへ分化誘導をかけた胚性がんP19細胞cDNA libraryをスクリーニングし、Necdin結合蛋白質としてNEFAとhnRNP Uを同定した。NEFAはカルシウム結合蛋白質であり、NecdinはNEFAのEF hand motifの領域に結合した。NEFAの発現を各組織で調べてみるとubiquitousに発現しているが、Necdinの高発現している脳と骨格筋に比較的豊富に存在していた。免疫電顕を行ったところNEFAは、細胞内ではカルシウム貯蔵に関与する核膜とERに局在していた。NEFAは分泌性蛋白質でもあるが、neuroblastoma N1E-115細胞にNecdinと共発現させるとNEFAの分泌が抑制され細胞内にとどまり、細胞内カルシウム濃度の上昇が引き起こされることがわかった。一方hnRNP Uは核マトリックス蛋白質で、N末端領域でMAR/SARと呼ばれるDNA領域と結合し、クロマチンをorganizeしていると考えられている。hnRNP UのNecdin結合ドメインを決定したところ、NecdinはhnRNP Uの核マトリックスターゲットドメインとは結合せず、そのすぐN末端側約200アミノ酸残基の領域と結合することがわかった。次にNecdinとhnRNP Uを共発現させ核マトリックスにおけるNecdinの局在の変化を調べたところ、Necdin単独では核小体に主に分布するのに対してhnRNP Uの共発現によって核質全体に分布するようになることがわかった。さらに同条件下でNecdinの細胞増殖抑制能について調べてみた。Colony formation assayおよびBrdU取り込み実験で、NecdinとhnRNP Uの共発現下によって著しい増殖抑制効果が認められ、この効果はhnRNP Uの核マトリックスターゲットドメインあるいはNecdin結合ドメインの欠失変異体では認められなかった。
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