| 研究課題/領域番号 |
12670138
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
大内田 守 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (80213635)
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| 研究分担者 |
堺 明子 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (60205698)
清水 憲二 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (10037286)
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| キーワード | 癌抑制遺伝子 / 染色体3p21 / Yeast Two-hybrid |
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| 研究概要 |
【緒言】
HD-PTP遺伝子産物はBROドメイン(アポトーシス制御に関わるAIP1やRho結合蛋白Rhophilin、酵母のProtein kinase-C/MAP kinase系に関わるBR01に高い相同性を持つドメイン)と、SH3結合モチーフを含むHistidine-richドメインを持つ新しいタイプのチロシンホスファターゼである。本研究はHD-PTPが肺癌に関わる癌抑制遺伝子である可能性を検討すると同時に、BROドメイン、Zn-handドメイン、ホスファターゼドメインを介した分子間相互作用と各領域の機能を明らかにし、細胞増殖もしくは癌化のシグナル伝達ネットワークにおけるHD-PTPの役割の解明を目指すものである。
【方法】
1.Yeast Two-hybridシステムを用いて、HD-PTPに結合する蛋白のスクリーニングを行い、Sequencingによる遺伝子の決定、及びHD-PTP蛋白との結合能を再確認を試みた。
2.HD-PTPのBROドメインと高い相同性を持つ新しいヒト遺伝子のクローニングを行った。
【結果】
1.上記の方法1により、HD-PTPのBROドメインに結合する蛋白の遺伝子16個とHD-PTPのHistidine-richドメインに結合する蛋白の遺伝子19個をクローニングした。
2.シークエンスの確認実験より、これらのうち多くが非特異的結合により得られてきたクローンであることが判明した。
3.残りのクローンに関しては細胞内で発現させた後、Pull-dawn assay法とWestern blottingにより結合能の再検討を行っているところである。
4.HD-PTPのBROドメインと高い相同性を持つヒト遺伝子Alixのクローニングを行い、ゲノム構造を明らかにしつつある。今後は肺癌組織における癌特異的遺伝子変異の検索を行う予定である。
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