1.前年度GPEscFv-envがin vitroでCEA発現細胞に特異的に遺伝子をターゲティングできることを確かめたが、今回in vivoでも特異的に遺伝子を導入できるかどうかを調べた。そのため自殺遺伝子iNOSを組み込んだGPEscFv-env/iNOSを、ヌードマウスに移植したヒトCEA産生胃癌細胞に投与した。その結果GPEscFv-env/iNOS投与群ではiNOSの効果により有意に癌抑制効果がみられ、このベクター系がin vivoでもin vitro同様有効であることが示唆された。 2.CEACAM1のhomotypicな接着作用がCEACAM1の癌抑制効果に強く関係していると考えられた。そこでCEACAM1の細胞接着活性に重要な構造を調べるために、CEACAM1のアミノ酸配列を部分的に変えた様々なmutantを作製し、その接着能を比較した結果、N-端ドメインの4ケ所のアミノ酸残基が重要であることがわかった。 3.エンビロープに抗CEA抗体のscFvを発現させたレトロベクターGPEscFv-envにCEACAM1遺伝子を組み込むため、amphotropic packaging cell line PA317を、前年度作製したpLNC-BGPa(CEACAM1のcDNAをamphotropic retroviral vector pLNCXに組み込んだもの)でtransfectした。その培養上清を用いGPEscFv-env産生クローンにBGPa遺伝子の導入を試みた。この過程に手間どったが、ベクターの再構築、packaging cellの変更等の試行錯誤の末、目的のクローンGPEscFv-env/BGPaが得られた。 4.今後得られたGPEscFv-env/BGPaをCEA産生癌細胞に投与し、その癌抑制効果を解析していく予定である。
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