| 研究概要 |
腸球菌性フェロモンレセプターTraA familyの機能・構造解析を目的に研究を行った。
1.TraA family蛋白、pAD1 TraA,pPD1 TraAのChimera蛋白Strep-tag融合蛋白として作成、精製した。
2.これらのchimera蛋白のDNA結合能、DNA結合能に対する性フェ口モンの影響を、DPAC法を用い調べ、DNA結合を行うdomainがN末側にあることを明らかにした。
3.TraA family蛋白(pAD1 TraA,pPD1 TraA,PrgX)のお互いのDNA結合部位に対するDNA結合特異性(選択性)を、DPACを用いて証明した。
4.フェロモン結合能のみを単独に、無修飾のフェロモンを用いて観察するために、PPAC(peptide associated protein-tag chromatography)を開発し、TraA family蛋白が、厳密なフェロモン結合特異性を持つこと明らかにした。更に、chimera蛋白のフェロモン結合特異性を調べた。
5.野生株より、新たに、複数のフェロモンに反応するバンコマイシン耐性に関わるプラスミドを見いだした。
6.腸球菌を用いた、in vitro過剰発現実験のための新規vector(藤本作成)を用い、pAD1 traAがtrans-actingであることを明らかにした。また、腸球菌から蛋白を直接、親和精製し、これをDPACに使用可能であることを示した。
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