ヘリコバクター・ピロリ熱ショック蛋白の病原的意義と宿主反応

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12670265
• 研究機関: 杏林大学
• 研究代表者: 神谷 茂 杏林大学, 医学部, 教授 (10177587)
• 研究分担者: 山口 博之 杏林大学, 医学部, 講師 (40221650) ; 田口 晴彦 杏林大学, 医学部, 講師 (20146541)
• キーワード: H.pylori / 熱ショック蛋白 / サイトカイン / ワクチン / エピトープ

研究概要

H.pyloriの熱ショック蛋白HSP60の遺伝子をクローニングしてβ-ガラクトシダーゼ遺伝子を含むpExプラスミドに組み込んだ(pHY3)。本プラスミドをE.coliにトランスフォームし、H.pylori HSP60とβ-ガラクトシダーゼの融合蛋白を産生するE.coli HY3株を作成した。HY3株のライセートをヒト胃癌由来KATOIII細胞に添加し、培養後、上清中に産生されるインターロイキン-8(IL-8)量をELISAにより定量した。添加融合蛋白量および培養時間に比例して、1500〜5200pg/mlのIL-8産生の誘導が認められた。
H.pyloriのHSP60に対するモノクローナル抗体H9に反応するエピトープを決定した。本領域からなるオリゴペプチドを合成しpH9と名付けた。HSP60蛋白およびpH9とH.pylori感染者(n=349)または非感染者(n=200)血清との反応性をELISAにより調べた。H.pylori HSP60に対しては感染者血清は非感染者血清に比べ、有意に高値を示した。一方、pH9に対しては感染者血清は非感染者血清に比べ、有意に低値を示した。本結果はpH9がH.pylori感染に対し防御的に作用する可能性を示唆した為、pH9の免疫効果を検討した。pH9(50μg)をアジュバントとともにC57BL/6マウスに腹腔内注射し、その後H.pyloriを経口接種した。2週間後、免疫マウスでの定着H.pylori菌数は対照の1/20〜1/30に低下していた。
これらの結果はH.pylori HSP60は胃粘膜での炎症を惹起する病原因子として作用するが、本蛋白の部分エピトープは本菌感染防御にも関与し得ることを示唆している。

研究成果

• [文献書誌] H.Yamaguchi et al.: "Induction of secretion of interleukin-8 from human gastric epithelial cells by heat-shock protein 60 homologue of Helicobacter pylori"Journal of Medical Microbiology. 48・10. 927-933 (1999)
• [文献書誌] T.Hanawa et al.: "Cloning, sequencencing, and transcriptional analysis of the dnaK heat shock operon of Listeria monocytogenes"Cell Stress & Chaperones. 5・1. 21-29 (2000)
• [文献書誌] S.Watanabe et al.: "Helicobacter pylori induces apoptosis in gastric epithelial cells through inducible nitric oxide"Journal of Gastroenterology and Hepatology. 15・2. 168-174 (2000)
• [文献書誌] A.Takagi et al.: "Plaunotol suppresses interleukin-8 secretion induced by Helocobacter pylori : Therapeutic effect of plaunotol on H.pylori infection"Journal of Gastroenterology and Hepatology. 15・5. 374-380 (2000)
• [文献書誌] H.Yamaguchi et al.: "Immune response against a cross-reactive epitope on the heat shock protein 60 homologue of Helicobacter pylori"Infection and Immunity. 68・6. 3448-3454 (2000)
• [文献書誌] Y.Sukegawa et al.: "Induction of autoimmune colitis by Yersinia enterocolitica 60-kDa heat-shock protein"Scandinavian Journal of Gastroenterology. 35・11. 1188-1193 (2000)
• [文献書誌] 神谷茂 他: "微生物・寄生虫とのかかわり-感染症学"日本看護協会出版会. 360 (2000)