多核巨細胞形成の誘導に関わるウイルス糖蛋白の構造変化の解析

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12670280
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 鶴留 雅人 三重大学, 医学部, 助教授 (50159042)
• キーワード: パラミクソウイルス科 / ルブラウイルス属 / シミアンウイルス5 / F蛋白 / 立体構造 / モノクローナル抗体 / 細胞融合 / エンドサイトーシス

研究概要

1.SV5(WR株)のF蛋白の22番目のアミノ酸LeuをProに変えた変異F蛋白(L22P)は、BHK細胞やHeLa細胞において単独での多核巨細胞誘導能を示す。昨年度までに(モノクローナル抗体の反応性の相違から)細胞表面に発現きせたWR株のF蛋白とL22Pの立体構造に相違があることを見い出している。
2.WR株のF蛋白とL22Pに対するモノクローナル抗体(6-7、21-1)の反応性の相違は、F蛋白がF1とF2に解裂する前でも認められた。
3.WR株のF蛋白を加熱(47-90℃)処理すると、これらのモノクローナル抗体の反応性は飛躍的に上昇したが、100℃まで過熱した場合には全く反応しなかった。
4.L22Pは細胞表面に発現後、エンドサイトーシスされたが、WR株のF蛋白はエンドサイトーシスされなかった。L22Pのエンドサイトーシスは解裂依存性であり、L22を細胞表面で解裂させることにより多核巨細胞誘導効率はほぼ100%になった。
5.エンドサイトーシスされたL22PのF1やF2の分解はバフィロマイシンA1により阻止された。またF1が分解して36kDaの産物を生ずることをV8プロテアーゼを用いたペプチド断片解析により明らかにした。
6.以上の結果から、WR株のF蛋白とL22Pとは解裂前の状態で立体構造の相違があるが、L22Pは解裂後にさらなる構造変化を起こし、その結果、エンドサイトーシスのシグナルを発現することが示唆された。また、解裂後に起こるこの構造変化がL22Pの失活を導いていることも示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Masato Tsurudome: "Hemagglutinin-neuraminidase-independent fusion activity of simian virus 5 fusion(F)protein:difference in conformation between fusogenic and nonfusogenic F proteins on the cell surface"Journal of Virology. Vol.75. 8999-9009 (2001)
• [文献書誌] Machiko Nishio: "High resistance of human parainfluenza type 2 virus protein-expressing cells to the antiviral and anti-cell proliferative activities of alpha/beta interferons:cysteine-rich V-specific domain is required for high resistance to the interferons"Journal of Virology. Vol.75. 9165-9176 (2001)
• [文献書誌] Mitsuo Kawano: "Recovery of infectious human parainfluenza type 2 virus from cDNA clones and properties of the defective virus without V-Specific cysteine-rich domain"Virology. Vol.284. 99-112 (2001)
• [文献書誌] Kouki Mori: "Cross-talk between RANKL and FRP-1/CD98 systems:RANKL-mediated osteoclastogenesis is suppressed by an inhibitory anti-CD98 heavy chain mAb and CD98-mediated osteoclastogenesis is suppressed by osteoclastogenesis inhibitory factor"Cellular Immunology. Vol.207. 118-126 (2001)
• [文献書誌] Noriki Miyamoto: "Human osteosarcoma-derived cell lines produce soluble factor(s)that induces differentiation of blood monocytes to osteoclast-like cells"International Immunopharmacology. Vol.2. 25-38 (2002)
• [文献書誌] Yoko Okamoto: "Expression and regulation of 4F2hc and hLAT1 in human trophoblasts"American Journal of Physiology Cell Physiology. Vol.282. C196-C204 (2002)