| 研究課題/領域番号 |
12670431
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| 研究機関 | 札幌医科大学 |
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研究代表者 |
石田 禎夫 札幌医科大学, 医学部, 助手 (20305220)
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| 研究分担者 |
佐々木 茂 札幌医科大学, 医学部, 助手 (10305229)
安達 正晃 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (70240926)
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| キーワード | アポトーシス / 樹状細胞 / モノクローナル抗体 / erbB-2 |
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| 研究概要 |
我々が作製したヒト・マウスキメラ抗erbB-2抗体(CH401)の誘導するアポドーシスのメカニズムを明らかにするために、CH401抗体が各MAPKカスケー卜にどのように影響を与えるかを検討した。MAPKカスケードには代表的なものに、増殖因子によって活性化され、増殖や生存シグナルを伝達するERK経路と、炎症性サイトカインやストレスによって活性化され、アポトーシスを誘導するJNK経路の2つがあるが、それぞれの経路についてCH401投与後の活性の変化について検討している。erbB-2高発現細胞株SV22にCH401キメラ抗体を加え、JNKの活性化を18時間後まで時間経過を追って観察した。経過中JNK蛋白の発現量に変化はなかったが、kinase assayではerbB-2高発現細胞株SV22で、2時間後からJNKの活性化が認められ、18時間後もJNKの活性化が認められた。コントロールの細胞ではJNKの活性化は認められなかった。
次にERK経路に与える影響を検討した。活性化ERKを認識するリン酸化特異抗体を用いたWestern blot法でERKのキナーゼ活性を検討したところ、SV22にCH401を加えてもERKの蛋白発現量は変化しなかったが、ERKのキナーゼ活性は抗体添加8時間後から低下した。これらの結果からCH401はアポトーシスに向かうJNK経路を活性化するが、細胞増殖に向かうERKを抑制することが示唆された。
また最終的にアポトーシスを誘導するcaspase3を活性化する機構には、ミトコンドリア損傷により放出されたチトクロームCを介して活性化されるcaspase9と、TNF-αやFasに結合するdeath receptorを介して活性化されるcaspase8の2つの経路があるが、CH401はどちらの経路を介してアポトーシスを誘遵するのか検討中である。
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