全身性エリテマトーデスにおけるTCRζ鎖mRNAの3'UTR遺伝子異常の解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12670436
• 研究機関: 埼玉医科大学
• 研究代表者: 津坂 憲政 埼玉医科大学, 医学部, 講師 (00245490)
• 研究分担者: 竹内 勤 埼玉医科大学, 医学部, 教授 (50179610)
• キーワード: 全身性エリテマトーデス / TCRζ鎖 / mRNA3'UTR / 半定量PCR法 / alternative splicing

研究概要

これまで我々は全身性エリテマトーデス(SLE)患者末梢血T細胞ではalternative splicingで生じた短い3'UTRをもつTCRζ鎖(ζ鎖)mRNA(ζmRNA/as-3'UTR)が優位に発現されることでζ鎖タンパクの発現が低下することを指摘してきた。そこで本年度はζmRNA/as-3'UTRとζ鎖タンパク発現とを定量的に比較検討した。SLE患者7例を対象とし、健常人4例を陰性コントロールとし、ζ鎖3'UTR cDNA発現は木下らの方法(Anal.Biochem.205:1992)に準じた半定量PCR法によって定量化した。G3PDH cDNAを陽性対照とし、全ζ鎖mRNAの定量にはζ鎖mRNAのopen reading frame(ORF)をはさむブライマーを用いた。ζ鎖タンパクの発現はモノクローナル抗ζ鎖抗体(TIA-2)を用いたwestern blot法で定量化した。その結果、SLE患者T細胞では健常人と比較して、wild form 3'UTRをもつζ鎖mRNA(ζmRNA/w-3'UTR)発現が有意(p<0.01)に低下し、ζmRNA/as-3'UTR発現が有意(p<0.01)に亢進していた。その一方、ORFで比較したζ鎖mRNA(ORF ζmRNA)発現に差はなかった。またζ鎖タンパク発現とζmRNA/w-3'UTR発現とに有意な正相関(r=0.931)が、ζmRNA/as-3'UTR発現とに負相関(-0.641)が認められた。しかし、ORF ζmRNA発現とは相関が認められなかった(r=-0.296)。以上から、SLE患者T細胞ではζmRNA/as-3'UTRが優位に発現されることでζ鎖発現が低下し、SLE発症に結びつく可能性が定量的にも示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Tsubota K,Fukita H,Tsuzaka K,Takeuchi T: "Mikulicz's disease and Sjogren's syndrome"Invest Ophthalmol Vis Sci. 41. 1666-1673 (2000)
• [文献書誌] Kanemastu S,Ihara K,Kira R, et al.: "Complement component 9 deficiency is not a susceptibility factor for SLE"Lupus. 9. 456-457 (2000)
• [文献書誌] 津坂憲政,竹内勤: "SLEのT細胞シグナル伝達異常"リウマチ科. 23. 471-477 (2000)
• [文献書誌] 津坂憲政,竹内勤: "T細胞レセブターとシグナル伝達"臨床免疫. 34. 440-446 (2000)
• [文献書誌] 津坂憲政,竹内勤: "全身性自己免疫疾患におけるT細胞シグナル異常"Molecular Medicine. 37. 898-904 (2000)