神経内分泌因子による肝障害増強作用のex vivo・in vitro系での検討

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12670496
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 岩井 將 愛媛大学, 医学部, 助教授 (00184854)
• 研究分担者: 堀内 正嗣 愛媛大学, 医学部, 教授 (40150338)
• キーワード: 肝障害 / ネクローシス / アポトーシス / 交感神経 / カテコラミン / 肝類洞細胞 / サイトカン

研究概要

今年度は、昨年度に実施したex vivoの肝灌流系における肝神経刺激のmediatorとなる因子の検索結果をもとにして、肝細胞死のメカニズムを検討した。
1)ラット肝細胞を分離し、肝実質細胞と非実質細胞に分け、それぞれ初代培養を行った。培養中に培養液を経時的に取り出し、細胞死のマーカーとして中に含まれるLDHおよびAST活性の時間的変化を測定した。培地にガラクトサミンを添加しておくと、濃度依存性に培地中のLDHおよびAST活性の増加が認められた。高濃度のガラクトサミン添加では、添加後6時間目で細胞の膨化と空胞形成など著しい変形が認められ、低濃度のガラクトサミン添加においては、細胞の形態変化の発現は遅延していた。形態変化の時間経過は、実質細胞と非実質細胞の間で明らかな差異は認められなかった。ガラクトサミンとともに交感神経伝達物質であるノルエピネフリンを添加するとガラクトサミン単独の場合よりも細胞死に至る時間が短縮した。
2)ラット肝から分離した肝実質細胞と非実質細胞を同じディッシュで培養する共培養系の確立を試みた。非実質細胞を培養した上へ新しく調整した肝実質細胞を添加した。肝実質細胞は、2日目までは生着していたが、その後線維芽細胞を含む非実質細胞部分が増殖した。
3)ガラクトサミンで肝障害を誘発したラット肝をex vivoで灌流しながら、肝交感神経を電気的に刺激すると、肝細胞壊死が増強するとともに、灌流液中にサイトカインであるTNFおよびIL-6が増加してくるが、この増加は、あらかじめガドリニウム投与により類洞のKupffer細胞を破壊しておくと抑制される。肝を部分的切除した後の再生肝を灌流した場合には、ベースのサイトカイン放出量が同じく増加していた。また、肝のパラフィン包埋切片を作成し、TUNEL法にてアポトーシス細胞を検出するとガラクトサミン障害肝においてTUNEL陽性細胞も増加していた。
以上の結果から、肝細胞障害に交感神経が関与しており、これには肝類洞細胞から産生されるサイトカインが関与することが示唆される。

研究成果

• [文献書誌] Masaru Iwai: "Increased secretion of tumor necrosis factor and interleukin-6 from isolated perfused liver of rats after partial hepatectomy"Cytokine. 13. 60-64 (2000)
• [文献書誌] Tai-Xing Cui: "Aggravation of chemically-induced injury in perfused rat liver by extracellular ATP"Life Science. 66. 2593-2601 (2000)
• [文献書誌] Masahiro Akishita: "Inhibitory effect of AT2 receptor on coronary arterial remodeling after aortic banding in mice"Circulation. 102. 1684-1689 (2000)
• [文献書誌] Tai-Xing Cui: "ATRAP, novel AT1 receptor associated protein, enhances internalization of AT1 receptor and inhibits vascular smooth muscle cell growth"Biochem Biophys Res Comm. 279. 938-941 (2000)
• [文献書誌] Tetsuya Shiuchi: "Involvement of bradykinin and nitric oxide in leptin-mediated glucose uptake in skeletal muscle"Endocrinology. 142. 608-612 (2001)
• [文献書誌] Yasuko Doi: "Attenuated action of insulin on glucose output caused by glucagon in the liver of Goto-Kakizaki rat perfused in situ"Pflugers Archiv. 442. 537-541 (2001)
• [文献書誌] Masahiro Akishita: "Angiotensin-converting enzyme inhibitor restrains inflammation-induced vascular injury in mice"J Hypertension. 19. 1083-1088 (2001)
• [文献書誌] Tai-Xing Cui: "Pivotal role of tyrosine phosphatase SHP-1 in AT2 receptor-mediated apoptosis in rat fetal vascular smooth muscle cell"Cardiovascular Res. 49. 863-871 (2001)
• [文献書誌] Lan Wu: "Roles of AT2 receptor stimulation associated with selective AT1 receptor blockade with valsartan in the improvement of inflammation-induced vascular injury"Circulation. 104. 2716-2721 (2001)
• [文献書誌] Lan Wu: "Effect of AT1 receptor blockade on cardiac remodeling in AT2 receptor null mice"Arteriosclero Thromb Vascular Biol. 22. 49-54 (2001)
• [文献書誌] Yuko Takeda-Matsubara: "Estrogen activates phosphatases and antagonizes growth-promoting effect of angiotensin II"Hypertension. 39. 41-45 (2001)
• [文献書誌] 岩井 將: "「トレーニング生理学」22章 肝・消化器系とトレーニング"杏林書院(印刷中). (2002)