毛細胆管膜キャリアーの胆汁うっ滞時における局在変化の検討

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12670517
• 研究機関: 帝京大学
• 研究代表者: 滝川 一 帝京大学, 医学部, 教授 (70197226)
• キーワード: 胆汁酸 / 有機アニオン / 毛細胆管膜キャリアー / MRP2 / BSEP / 胆汁うっ滞

研究概要

胆汁酸および有機アニオンの胆汁中排泄は、ATP依存性の1次性能動輸送を行う毛細胆管膜トランスポーターにより行われる。Multidrug resistance protein 2(MRP2)は抱合ビリルビンなどの有機アニオンの排泄キャリアーであり、Dubin-Johnson症候群で遺伝子異常が認められる。アミノ酸抱合胆汁酸の胆汁中排泄はbile salt export pump(BSEP)により行われ、家族性進行性肝内胆汁うっ滞2型で遺伝子異常が認められる。各種胆汁うっ滞モデルでMRP2およびBSEPのdown regulationが認められるが、それ以上に毛細胆管膜へのトランスポーターのvesicular targetingが障害の重要性が提唱されはじめた。本研究では胆汁うっ滞の病態の解明のため、胆管結紮(3日間)およびlipopolysaccharide(LPS)によるラット胆汁うっ滞モデルでのMRP2およびBSEPの肝細胞内での局在を、これらに対する抗体を用いた免疫染色による検討した。急速凍結した肝組織をスライドグラス上に固定した後、抗MRP2ポリクローナル抗体、抗BSEPポリクローナル抗体と反応させた。これらの抗体はC末端のペプチドを合成しK L Hにcouplingさせたものをウサギに免疫して作製した。HRP標識した2次抗体と反応させ鏡検したところ、両トランスポーターの毛細胆管膜への局在が確認された。胆管結紮ラットでは、両トランスポーターの毛細胆管膜における染色性の低下がみられ、これらの機能低下が示唆された。免疫染色による検討では、LPSによる胆汁うっ滞モデルでのトランスポーターの変化は認められなかった。なお、市販の抗MRP2モノクローナル抗体を用いた検討でも同様の結果が得られた。今後、検討の不十分であった共焦点レーザー顕微鏡による観察法を検討するとともに、ヒト肝での検討も行いたい。

研究成果

• [文献書誌] Akita H, et al: "Characterization of bile acid transport mediated by multidrug resistance associated protein 2 and bile salt export pump"Biochim Biophys Acta. 1511. 7-16 (2001)
• [文献書誌] Takikawa H. et al: "Effect of bile acids on biliary excretion of cyclosporin A in the rat"Hepatol Res. 20. 128-132 (2001)
• [文献書誌] Takikawa H, et al: "Biliary excretion of femocapril in zone 1 and zone 3 injured rat"Hepatol Res. 20. 216-220 (2001)
• [文献書誌] Ogasawara T, Takikawa H: "Biliary excretion of phenolphthalein glucuronide in the rat"Hepatol Res. 20. 221-231 (2001)
• [文献書誌] Akimoto K, et al: "Biliary excretion of tauroursodeoxycholate-3-sulfate in the rat"Steroids. 66. 701-705 (2001)
• [文献書誌] Akita H, et al: "Transport activity of human MRP3 expressed in sf 9 cells : comparative studies with rat MRP3"Pharm Res. 19. 34-41 (2002)