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胆汁酸および有機アニオンの胆汁中排泄は、ATP依存性の1次性能動輸送を行う毛細胆管膜トランスポーターにより行われる。multidrug resistance protein 2(MRP2)は抱合ビリルビンなどの有機アニオンの排泄キャリアーであり、Dubin-Johnson症候群で遺伝子異常が認められる。アミノ酸抱合胆汁酸の胆汁中排泄はbile salt export pump(BSEP)により行われ、家族性進行性肝内胆汁うっ滞2型で遺伝子異常が認められる。各種胆汁うっ滞モデルでMRP2およびBSEPのdown regulationが認められるが、それ以上に毛細胆管膜へのトランスポーターのvesicular targetingが障害の重要性が提唱されはじめた。本研究では胆汁うっ滞の病態の解明のため、胆管結紮(3日間)およびlipopolysaccharide(LPS)によるラット胆汁うっ滞モデルでのMRP2およびBSEPの肝細胞内での局在を、これらに対する抗体を用いた免疫染色による検討した。急速凍結した肝組織をスライドグラス上に固定した後、抗MRP2ポリクローナル抗体、抗BSEPポリクローナル抗体と反応させた。これらの抗体はC末端のペプチドを合成しKLHにcouplingさせたものをウサギに免疫して作製した。HRP標識した2次抗体と反応させ鏡検したところ、両トランスポーターの毛細胆管膜への局在が確認された。胆管結紮ラットでは、両トランスポーターの毛細胆管膜における染色性の低下がみられ、これらの機能低下が示唆された。免疫染色による検討では、LPSによる胆汁うっ滞モデルでのトランスポーターの変化は認められなかった。なお、市販の抗MRP2モノクローナル抗体を用いた検討でも同様の結果が得られた。今後、検討の不十分であった共焦点レーザー顕微鏡による観察法を検討するとともに、ヒト肝での検討も行いたい。
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