| 研究概要 |
McLeod症候群はX染色体(Xp21)にコードされる37kDaの膜蛋白質であるKx抗原の欠損により発症する,まれな伴性劣性遺伝性神経筋疾患である.本症は有棘赤血球,赤血球寿命の短縮といった赤血球系の異常に加え,性格変化,舞踏運動といったハンチントン病類似の中枢神経症状,血清CK値の著明な上昇,四肢の脱力・萎縮といった筋症状などを呈する.しかし,なぜ本症に神経筋病変が発症するのかは全く不明である.Kx抗原は赤血球膜上に存在するので,骨格筋においても原形質膜に存在することが予想される.したがって本研究の目的は,正常およびMcLeod症候群患者の骨格筋および中枢神経系におけるXK mRNAおよびその蛋白質であるKx抗原の発現と局在を明らかにすることである.
本年度は以下の研究を行った.
1)XK遺伝子の解析
本家系がMcLeod症候群であることを確定するために,患者および家系内のメンバーの末梢白血球よりゲノムDNAを抽出し,XK遺伝子の3個のエクソンをすべてカバーする位置にプライマーを設定し,PCRにて増幅し,直接塩基配列法により塩基配列を決定した.その結果,患者ではエクソン2においてコドン151における一塩基(C)の挿入を認め,この変異は今まで報告の無い新たな遺伝子変異であった.母親は正常と異常のヘテロ接合体であり,父親と姉は正常であった.骨格筋におけるXK mRNAの発現について検討するために,患者および正常対照者の生検骨格筋よりRNAを抽出し,RT-PCRを行ったが,mRNAは正常に発現していた.母親は正常と異常のヘテロ接合体であり,父親と姉は正常であった.骨格筋におけるXK mRNAの発現について検討するために,患者および正常対照者の生検骨格筋よりRNAを抽出し,RT-PCRを行ったが,mRNAは正常に発現していた.
2)抗Kx抗体の作成
Kx抗原のアミノ酸配列より予想される部位の合成ペプチド(KNGLSEEIEKEVGQAEG)を作成し,それをウサギに免疫し,Kx抗原に対する抗ペプチド抗体を作成した.現在,本抗体の特異性について免疫組織化学およびウエスタン・ブロットにて確認中である.
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