培養脳微小血管内皮細胞への血小板の粘着・凝集-ビデオ強化型顕微鏡による観察-

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12670617
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 棚橋 紀夫 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (10124950)
• 研究分担者: 佐藤 秀樹 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (60296556)
• キーワード: platelef adhesion / endo thelial cell / beraprost / VEC microscopy

研究概要

【目的】既に我々は、活性化血小板が培養血管内皮細胞への直接粘着・凝集する現象をビデオ強化型(VEC)顕微鏡で動的観察した。今回はこれらの粘着・凝集現象に対する抗血小板薬ベラプロストナトリウム(BS)の効果を検討した。
【方法】ヒト脳微小血管内皮細胞(human brain microvascular endothelial cell : HBEC)を観察用カバーグラス上に,confluentな状態に培養し,VEC顕微鏡の観察台に装着した。VEC顕微鏡は、倒立型Nomarski顕微鏡、微分干渉対物レンズ、CCDカメラ、画像処理装置からなり、拡大率3000倍で観察した。また健常人より採血した多血小板血漿(PRP)を作成した。実験(1):PRP+ADP(2μM)をHBEC上を30分間灌流(shear rate 10/sec)し,洗浄後、HBECに粘着した血小板数を定量評価した(A群)。実験(2)PRPをBS O.1nMで前処置しADP(2μM)を加え同様の観察を行った(B群)。実験(3)PRPをBS 1 nMで前処置しADP(2μM)を加え同様の観察を行った(C群)。実験(4)PRPをBS 10nMで前処置しADP(2μM)を加え同様の観察を行った(D群)。
【成績】HBECへの平均粘着血小板数は、A群;16.2±12.6/900μm^2,B群では16.5±18.6/900μm^2(P<0.01,vs A群)、C群;4.1±1.8/900μm^2(P<0.01,vs A群)、D群;2.8±2.4/900μm^2(P<0.05,vs A群)であった。【結論】上記結果は、ベラプロストナトリウムはADP刺激による活性化血小板の低流速下での培養ヒト脳微小血管内皮細胞への直接粘着・凝集を用量依存性に抑制することを示している。

研究成果

• [文献書誌] Tanahashi.N et al.: "Adhesion of adenousine diphosphate-activated platelets to human Drain microvascular endo the lial cells underflow"Neurosci Left. 301C. 33-36 (2001)
• [文献書誌] Tanahashi.N et al.: "Platelet adhesion to human brain microvascular endotheliel cells in vitro with special reference to adhesion site"Microcirculation annual 2000. 16. 63-64 (2000)
• [文献書誌] Abe T, Tanahashi N et al.: "Role of P-selection in the adhesion of adenosine diphosphate-activated platelets to human brain microvasculer endo theliel cells under flow conditions"Microcirculation annual 2001. 17. 83-84 (2001)