高比重リポ蛋白(HDL)による末梢細胞からのコレステロール引抜きの分子機構の解明

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12670666
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 酒井 尚彦 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (80294073)
• 研究分担者: 西田 誠 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 平野 賢一 大阪大学, 医学系研究科, 助手 ; 山下 静也 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (60243242)
• キーワード: 動脈硬化 / コレステロール逆転送 / HDL受容体 / マクロファージ / GPI-anchor蛋白 / コレステロールエフラックス / 高比重リポ蛋白(HDL)

研究概要

平成12年度はヒト単球由来マクロファージ(MΦ)においてHDLに特異的に結合し、MΦからのコレステロールの引き抜きに関与するHDL結合蛋白の存在を明らかにした。この蛋白は分子量80KDaと130KDaからなり、80KDaの蛋白はMΦをコレステロール負荷することによって誘導されること、MΦをトリプシン処理するとHDL結合能を失うことより細胞膜表面に存在するHDL受容体と考えられた。また、このHDL結合蛋白はコレステロールに富む細胞膜分画Detergent Resistant Membrane(DRM)に局在すること、MΦをPI-PLCによって処理したりmannosamineによって処理することによってHDL結合能およびコレステロール引き抜き能が有意に低下することからGPI-anchor型蛋白であることも明らかにした。さらに、我々が作製したHDLアフィニティカラムを用いて、PI-PLCにて処理した単層培養MΦの培養上清よりGPI-anchor型HDL結合蛋白をSDS-PAGE上銀染色で単一バンドにまで精製した。今後この蛋白のアミノ酸配列を決定し、cDNAをクローニングしていく予定である。

研究成果

• [文献書誌] Lambert G,Sakai N, et al.: "Analysis of glomerulosclerosis and atherosclerosis in lecithin cholesterol acyltransferase deficient mice"J Biol Chem. (in press).
• [文献書誌] Nagano M, et al.: "A point mutation (-69 G to A) in the promoter region of cholesteryl ester transfer protein gene in Japanese hyperalphalipoproteinemic subjects"Arterioscler Thromb Vasc Biol. (in press).
• [文献書誌] Zhang E, et a;.: "Expression of cholesteryl ester transfer protein in human atherosclerotic lesions and its implication of the reverse cholesterol transport"Atherosclerosis. (in press).
• [文献書誌] Miyaoka K,Kuwasako T, et al.: "CD36 deficiency associated with insulin resistance"Lancet. 357. 686-687 (2001)
• [文献書誌] Matsuyama A, et al.: "Characterization and purification of a GPI-anchored type HDL-binding protein on human monocyte-derived macrophages. Biochem Biophys Res Commun"Biochem Biophys Res Commun. 272. 864-871 (2000)
• [文献書誌] Hiranao K, et al.: "Decreased expression of a member RhoGTPase family, Cdc42Hs, in cells from Tangier disease. -The small G protein may play a role in cholesterol efflux from the cells"FEBS letter. 484. 275-279 (2000)