2001 年度実績報告書

高比重リポ蛋白(HDL)による末梢細胞からのコレステロール引抜きの分子機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号	12670666
研究機関	大阪大学
研究代表者	酒井尚彦大阪大学, 医学系研究科, 助手 (80294073)
研究分担者	平野賢一大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30332737) 山下静也大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (60243242)
キーワード	動脈硬化 / コレステロール逆転送 / HDL受容体 / マクロファージ / GPI-anchor蛋白 / コレステロールエフラックス / 高比重リポ蛋白(HDL) / moesin
研究概要	平成13年度は、PI-PLCにて処理した単層培養マクロファージ(MΦ)の培養上清よりGPI-anchor型HDL結合蛋白をHDLアフィニティカラムを用いて精製した。精製した蛋白をエンドペプチダーゼ処理し、フラグメントのアミノ酸配列を決定すると、ヒトmoesinの内部配列と一致した。これまで、moesinは細胞膜の細胞質側に存在し、またGPI-anchor型蛋白でもないことが報告されているが、mocsinに対する抗体はこのmocsin様GPI-anchor型HDL結合蛋白を認識することを確認した。次にこの抗moesin抗体を用いてMΦを前処理するとHDLおよびapo A-IのMΦに対する結合が阻害され、それに引き続くコレステロール引き抜きも抑制された。また、抗moesin抗体を用いたMΦの膜蛋白の二次元電気泳動と免疫組織化学的検索によって、このmoesin様HDL結合蛋白が実際に細胞膜表面に発現していることを確認した。さらにmoesin様HDL結合蛋白はMΦに特異的に発現され、MΦの分化およびコレステロール負荷によって発現が誘導される。以上のことからこのmoesin様HDL結合蛋白は細胞表面に存在し、コレステロール引き抜きに関与するGPI-anchor型のHDL結合蛋白であることを確認した。今後、MΦのcDNAライブラリーをスクリーニングして、cDNAをクローニングしmoesinとの同一牲およびさらなる性質の検討を行う。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Sakai N, et al.: "A large scale isolation of shear stress-responsive genes from cultured human endothelial cells by preparation of a subtracted cDNA library"Atherosclerosis. (in press).
[文献書誌] Sakai N, et al.: "Decreased microsomal triglyceride transfer protein activity contributes to initiation of alcoholic liver steatosis in rats"J Hepatol. 36. 157-162 (2002)
[文献書誌] Sakai N, et al.: "Expression and functional analyses of novel mutation in ATP-binding cassette ransporter-1 in Japanese patients with high density lipoprotein deficiency"Biochem Biophys Res Commun. 290. 713-721 (2002)
[文献書誌] Lambert G, Sakai N, et al.: "Analysis of glomeruloscierosis and atherosclerosis in lecithin cholesterol acyltransferase deficient mice"J Biol Chem. 276. 15090-15098 (2001)
[文献書誌] Sakai N, et al.: "A point mutation (-69 G to A) in the promoter region of cholesteryl ester transfer protein gene in Japanese hyperalphalipoproteinomis subjects"Arterioscier Thromb Vasc Boil. 21. 985-990 (2001)
[文献書誌] Sakai N, et al.: "Characterization and purification of a GPI-anchored type HDL-binding protein on human monocyte-derived macrophages. Biochem Biophys Res Commun"Biochem Biophys Res Commun. 272. 864-871 (2000)

2001 年度 実績報告書

高比重リポ蛋白(HDL)による末梢細胞からのコレステロール引抜きの分子機構の解明

研究代表者

酒井 尚彦 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (80294073)

研究成果

[文献書誌] Sakai N, et al.: "A large scale isolation of shear stress-responsive genes from cultured human endothelial cells by preparation of a subtracted cDNA library"Atherosclerosis. (in press).

[文献書誌] Sakai N, et al.: "Decreased microsomal triglyceride transfer protein activity contributes to initiation of alcoholic liver steatosis in rats"J Hepatol. 36. 157-162 (2002)

[文献書誌] Sakai N, et al.: "Expression and functional analyses of novel mutation in ATP-binding cassette ransporter-1 in Japanese patients with high density lipoprotein deficiency"Biochem Biophys Res Commun. 290. 713-721 (2002)

[文献書誌] Lambert G, Sakai N, et al.: "Analysis of glomeruloscierosis and atherosclerosis in lecithin cholesterol acyltransferase deficient mice"J Biol Chem. 276. 15090-15098 (2001)

[文献書誌] Sakai N, et al.: "A point mutation (-69 G to A) in the promoter region of cholesteryl ester transfer protein gene in Japanese hyperalphalipoproteinomis subjects"Arterioscier Thromb Vasc Boil. 21. 985-990 (2001)

[文献書誌] Sakai N, et al.: "Characterization and purification of a GPI-anchored type HDL-binding protein on human monocyte-derived macrophages. Biochem Biophys Res Commun"Biochem Biophys Res Commun. 272. 864-871 (2000)

2001 年度実績報告書

酒井尚彦大阪大学, 医学系研究科, 助手 (80294073)