| 研究課題/領域番号 |
12670784
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
吉岡 俊正 東京女子医科大学, 医学部・薬理学, 助教授 (60146438)
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| 研究分担者 |
塚原 富士子 東京女子医科大学, 医学部・薬理学, 助手 (40119996)
村木 篁 東京女子医科大学, 医学部・薬理学, 教授 (50051446)
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| キーワード | グルココルチコイド / グルココルチコイド受容体 / 酸化ストレス / 一酸化窒素 / 熱ショックタンパク質 / 細胞質-核間輸送 / 分子間相互作用 / HSC70 |
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| 研究概要 |
1 フリーラジカルストレスによるグルココルチコイド感受性低下の検証とその薬理学的治療
(1)酸化ストレスによりグルココルチコイド感受性が低下することをCOS7細胞に導入したグルココルチコイド感受性レポーター遺伝子の転写活性により明らかにした。
(2)Green fluorescent protein(GFP)融合グルココルチコイド受容体(GR)発現プラスミドをCOS7細胞に導入し、酸化ストレスを加えるとステロイドによるGFP-GRの細胞質から核への移動が阻害することから、酸化ストレスはGRの細胞質-核輸送を阻害することを明らかにした。
(3)GRと複合体をつくり、GRの細胞質-核輸送に関与する熱ショックタンパク質群のなかで、HSC70を細胞に強発現させると、酸化的ストレスによるグルココルチコイド感受性低下が抑制されることをレポーター遺伝子の実験系で明らかにした。
(4)リコンビナントヒトHSC70を作成し、HSC70の抗酸化能をin vitroの系で検討し:1)フリーラジカル検出試薬(H2F)を用いて検討によりHSC70はフリーラジカル発生系によるH2Fの蛍光増強を抑制すること;2)電子スピン共鳴法を用いた検討で、HSC70はヒドロキシラジカル消去作用があることを明らかにした。
2一酸化窒素(NO)によるグルココルチコイド感受性変化の分子機構の解明
(1)NOによりグルココルチコイド感受性が低下することをCOS7細胞に導入したグルココルチコイド感受性レポーター遺伝子の転写活性により明らかにした。
(2)GFP-GR発現プラスミドをCOS7細胞に導入し、NOがステロイドによるGFP-GRの細胞質から核への移動を阻害することから、NOストレスはGRの細胞質-核輸送を阻害することを明らかにした。
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