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Bernard-Soulier症候群(BSS)患者2家系において見いだした新規の遺伝子異常の結果惹起される表現型の異常を解析した。発現プラスミドにGPIb/IX複合体を構成する3種類の遺伝子を組み込み、3種類の発現用組み替えプラスミドを作成した。これに加えて、我々が見いだした遺伝子異常を組み込んだ変異体も作成し野生型との比較に用いた。遺伝子発現実験の結果、FACSによる表面抗原の解析で変異体において膜表面GPIb/IX複合体の発現が著しく低下していることが確認された。また、免疫染色においてもGPIb/IX複合体の発現は著しくて低下しており、我々の見いだした遺伝子異常の結果、BSS表現型の異常が惹起されることを証明した。
さらに、上記で用いた組み替えプラスミドをもちいて蛋白質の構造-機能相関解明のための解析を施行予定である。具体的には、GP遺伝子に存在するleucine rich repeat (LRR) 構造に着目している。このLRR構造は蛋白質の高次構造維持に重要であると考えられているが、GPIb/IX複合体発現との関係についてはnatural mutationを解析した幾つかの報告が存在するに過ぎず、詳しい検討はなされていない。そこで、GP遺伝子に存在するLRR構造内の1アミノ酸残基に変異を導入し、その結果もたらされる膜表面GPIb/IX複合体発現量の変化をFACSあるいは免疫染色により解析することとした。これによりGPIb/IX複合体発現にかかわるGP蛋白内LRR構造の機能が明らかとなる。
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