| 研究概要 |
【目的】
造血幹細胞のクローン性異常に基づく造血障害と考えられている骨髄異形成症候群(MDS)に対し新しい治療法の開発のため、サイトカインレセプター(G-CSF receptor : G-CSFR)遺伝子をMDS細胞にレトロウイルスベクター(pMX)を用いて遺伝子導入を行い、G-CSF receptorにおける増殖抑制シグナルの検討を行った。
【結果】
(1)G-CSFRにおける各血球分化過程での情報伝達経路(JAK-STAT系)のリン酸化の解析のため、G-CSFRの発現のないヒトリンパ球系細胞株CEMにG-CSFR遺伝子を導入した(CEM-GR)。CEM-GRではG-CSFの刺激により、G-CSFRとJAK2のチロシンリン酸化が初期に生じ、次にSHドメインを持つチロシンリン酸化酵素(SH-PTP1)のチロシンリン酸化を認め、それに続きJAK2のチロシンリン酸化は減少した。
(2)G-CSFRの4つのチロシン残基を各々フェニールアラニンに置換したG-CSFRを作製した(Y704F,Y729F, Y744F,Y764F)。Wild type G-CSFRと4種類の変異型G-CSFRをCEM細胞に導入し、G-CSF刺激による増殖効果と、同時に免疫沈降/免疫ブロット法にてSH-PTP1のG-CSFRへの結合部位を検討した結果、Y729F G-CSFRを導入したCEM細胞ではG-CSF刺激において増殖増強効果が認められた。Y729F G-CSFRではSH-PTP1が結合せず、JAK2の増殖シグナルの抑制が起きなかった。
【考察】
以上の結果より、G-CSFRにおいてはG-CSFの刺激によりリン酸化されたG-CSFRの729番目のチロシン残基にSH-PTP1が結合し、JAK2の脱リン酸化を起こすことにより、細胞増殖を制御していることが示された。
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