| 研究課題/領域番号 |
12670990
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
藤村 欣吾 広島大学, 医学部, 教授 (80034114)
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| 研究分担者 |
下村 壮司 広島大学, 医学部, 助手 (20263741)
藤元 哲郎 広島大学, 医学部, 助教授 (00221549)
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| キーワード | 血小板 / GPV / フォンヴィルブランド因子受容体 / トロンビン / 情報伝達 / Two hybrid system / 細胞内ドメイン / 巨核球 |
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| 研究概要 |
血小板のフォンヴィルブランド因子に対するレセプターであるGPIb/V/IX複合体のサブユニットの一つであるGPVについて、血小板活性化におけるnegative regulatorとしての機能発現を明らかにするために、GPVの細胞内ドメインと結合する蛋白をyeast two hybrid systemを用いてスクリーニングを行った。ヒトとマウスのGPVではマウスの方がアミノ酸が8個余分に付加されており、マウスGPV由来の細胞内ドメインのcDNAからbait vectorを作成した。さらにマウス巨核球系細胞株におけるGPVの発現をスクリーニングし、もつともGPVの発現の高かった細胞株よりcDNAライブラリーを作成した。yeast two hybrid systemを用いたスクリーニングでfilter lift assayの結果、2種の陽性クローンを得、さらにこれらのクローンの解析を行っている。また、GPIbの細胞内ドメイン結合蛋白の1つであるFlaminについて、そのさらに下流の情報伝達系を明らかにするために、Filaminの結合蛋白もtwo hybrid systemによって同定し、その機能解析を行った。同時に、GPVのノックアウトマウスによる解析では、GPVが血小板機能を負に調節する膜蛋白であるとの考えと、その反対の報告もなされており、過剰発現での解析も必要と考え、トランスジェニック作成用のベクターも作成し、基礎検討を行っている。
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