成人T細胞白血病(ATL)細胞のアポトーシス制御因子の探索

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12670993
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 前田 隆浩 長崎大学, 医学部・附属病院, 講師 (40284674)
• 研究分担者: 上平 憲 長崎大学, 医学部, 教授 (80108290) ; 森内 良三 長崎大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (60210142)
• キーワード: Fas / 成人T細胞白血病 / ATL / アポトーシス / 遺伝子変異

研究概要

1.抗Fas抗体抵抗性の成人T細胞白血病(ATL)細胞株RSO4
IgM抗Fas抗体抵抗性のATL細胞株であるRSO4の樹立に成功した。この細胞株にIgM抗Fas抗体を添加培養してもapoptosisは起こさず、細部増殖にもほとんど影響を与えないことが確認された。このRSO4からtotal RNAを抽出し、Fas遺伝子をtargetにしたprimer pairでRT-PCRを実施した後、subcloningを行いFas抗原遺伝子cDNA全長のsequenceを行った。この結果、開始コドンから179番目の塩基アデニンがチミンヘ変化する点突然変異を検出した。この変異によってFas抗原の細胞外部分であるexon 1の44番目のヒスチジンがアルギニンに変異していることとなる。この点突然変異を有したFas抗原蛋白の三次元解析では、正常のFas抗原に比し細胞外部分の36〜42アミノ酸付近の構造に大きな変化が生じることが予想された。抗Fas抗体によるapoptosisはFasと抗体との結合と、これに引き続いて起こるFasの三量体形成によって生じ、epitope mappingにより抗体結合部位は126〜135アミノ酸部位と考えられていることから、RSO4の変異はFasの正常な三量体形成を阻害している可能性が示唆される。現在、変異Fas遺伝子を他の細胞に導入することで、機能解析を実施している段階である。
2.抗Fas抗体抵抗性の成人T細胞白血病(ATL)細胞株OMT
RSO4とは別系統のATL細胞株としてOMTを樹立した。IgM抗Fas抗体に抵抗性を有しているが、添加培養によって遅発的に軽いapoptosisを起こす。RT-PCRで得られたFas遺伝子cDNA全長のsequence解析では変異がないことが確認された。現在、レトロウイルスベクターによる発現cDNAライブラリーを作成している段階である。

研究成果

• [文献書誌] Maeda T.: "Success treatment with a chimeric anti-CD20 monoclonal antibody (IDEC-C2B8,rltuximab) for a patient with relapsed mantle cell lymphoma who developed a human anti-chimeric antibody."Int.J.Hematol.. (in press).
• [文献書誌] Isomoto H.: "Adult T-cell leukemia with unusual esophageal lesion."Gastrointest.Endosc.. (in press).
• [文献書誌] Isomoto H.: "Clinical and endoscopic features of adult T-cell leukemia/lymphoma with duodenal involvement report of three cases with a review of literature."J.Clin.Gastroenterol.. (in press).
• [文献書誌] Kamihira S.: "Clinical and oncological significance of aberrant Fas (APO-1/CD95) isoform expression in adult T-cell leukemia."Indian J.Clin.Biochem.. 15. 101-109 (2000)
• [文献書誌] Kamihira S.: "Real-time polymerase chain reaction or quantification of HTLV-1 proviral load : application for analyzing aberrant integration of the proviral DNA in adult T-cell leukemia."Int.J.Hematol.. 72. 79-84 (2000)
• [文献書誌] Yamada Y.: "Lactacystin activaes FLICE (caspase 8) protease and induces apoptosis in Fas-resistant adult T-cell leukemia cell lines."Eur.J.Haematol.. 64. 315-322 (2000)