白血病の分化誘導療法をめざしたETV6/ARG融合遺伝子の機能解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12671016
• 研究機関: 国立国際医療センター(研究所)
• 研究代表者: 佐藤 裕子 国立国際医療センター, 研究所, 室長 (10137713)
• キーワード: ETV6 / ARG / 融合遺伝子 / チロシン・キナーゼ / 分化誘導 / transformation / IL3 independent / BaF3 / NIH3T3

研究概要

私達がt(1;12)(q25;p12)転座を持つAML-M3細胞株HT93Aより単離したETV6/ARG融合遺伝子はチロシンキナーゼである。本年度はBTV6/ARG融合遺伝子の機能を解析すべく、以下のように実験を行った(論文はOncogeneに受理された)。
1.4種類のfull construct((1)full HLH domainを持つETV6/long ARG,(2)full HLH damainを持つETV6/short ARG,(3)truncated HLH domainを持つETV6/long ARG,(4)truncated HLH domainを持つETV6/short ARG)を作成して、COS7細胞にtransfectし、発現があることを確認した。
2.4種類のfull constructをIL3 dependent cell line(Ba/F3)にtransfectし、IL3 independencyの有無を検討したところ、(1)のみ、ETV6/ABLと同程度の効果を発揮した。
3.同様に4種類のfull constructをRat1細胞株とNIH3T3細胞株にtransfectし、コロニー形成法で造腫瘍性の有無をみたところ、(1)のみ、Rat1細胞株でコロニー形成が見られた。
4.4種類のfull constructのうち、(1)のみがチロシンキナーゼ活性を有していた。
5.BTV6/ABLでリン酸化されることが知られているPI3K,SHC,ras-GAP,CRK-Lのシグナル伝達分子は、同様に(1)を発現したBa/F3細胞でリン酸化されていた。
以上のことから、BTV6/ARG融合遺伝子はBTV6/ABL融合遺伝子と同様にoncogeneとしての機能を持っていること、この機能を発揮するにはETV6遺伝子のHLH domainが必須であることが判明した。

研究成果

• [文献書誌] Iijima Y,Sato Y, et al.: "Transformation of BaF3 cells and Rat-1 cells by ETV6/ARG."Oncogene,. (accepted).
• [文献書誌] Sato Y,Rowley JD et al.: "Chromosomal instability in chromosome band 12p13 : multiple breaks leading to complex rearrangements including cytogenetically undetectable sub-clones."Leukemia,. (in press).
• [文献書誌] Ogiue-Ikeda M,Sato Y, et al.: "Inhibition of leukemia cell growth under magnetic fields of up to 8T."IEEE Transactions on Magnetics,. (in press).
• [文献書誌] Kano Y,Sato Y, et al.: "In vitro cytotoxic effects of a tyrosine kinase inhibitor STI571 in combination with commomly used antileukemic agents."Blood,. (in press).
• [文献書誌] Nakazato H,Sato Y, et al.: "TEL/MN1 fusion in a AML-M2 patient who showed strong resistance to treatment."Brit J Haematol,. (in press).
• [文献書誌] Nishio M,Sato Y, et al.: "Stem cell factor prevents Fas-mediated apoptosis of human erythroid precursor cells with Src-family kinase dependency."Exp Hematol. 29. 19-29 (2001)
• [文献書誌] Iijima Y,Sato Y, et al.: "A new ETV6(TEL) partner gene, ARG (ABL related gene or ABL2) identified in a AML-M3 cell line the t(1;2)(q25;p13) translocation."Blood. 93. 2126-2131 (2000)